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2025dream

新虫 (小有名气)

[交流] Biacore™ 8K SPR系统弱相互作用检测的几点技术思考 已有1人参与

最近在使用Biacore 8K SPR系统进行弱亲和力分子互作检测时(KD~10⁻⁴M量级),遇到几个值得深入探讨的技术问题。这类高灵敏度检测对系统参数设置提出了特殊要求,想和大家交流下经验。

在缓冲液体系选择方面,发现DMSO浓度超过3%时,虽然能改善小分子溶解度,但会导致Biacore™ 8K SPR系统的参考通道出现明显基线漂移。对比测试显示,添加0.05% Tween-20的PBS缓冲体系在长时程实验中稳定性更好。

关于配体固定化策略,Biacore™ 8K SPR系统的高灵敏度检测能力使得低密度固定化(<5000RU)成为可能。不过实际操作中发现,过低的固定化密度会显著降低弱相互作用信号的信噪比。如何在质量传输效应和信号强度之间找到平衡点,可能需要针对不同分子体系进行优化。

温度控制是另一个值得注意的因素。在4℃条件下,Biacore™ 8K SPR系统检测某些疏水相互作用时响应值比常温条件提高15-20%,但需要特别注意冷凝问题。有同行尝试过在样品舱加装局部温控模块来改善这个问题吗?

这些在弱相互作用检测中积累的经验,或许对其他使用Biacore™ 8K SPR系统的研究者有所启发。欢迎大家一起探讨更多优化方案,比如再生条件的选择对配体稳定性的影响等。
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123tu

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
仪器可以设置样品仓温度的,你加冰水浴做实验就行了。这个低密度,我们感觉小于8000就测不出小分子了。对大分子小于50算低密度吧。加吐温是默认的条件,小分子的吸附是远大于普通蛋白样品的,不加我们感觉重复性不好
2楼2025-11-05 09:43:08
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