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[交流]
α-银环蛇毒素的合成与表达、相关研究案例
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 1. 合成与表达◦ 化学合成：化学合成 α- 银环蛇毒素具有挑战性，但它允许方便地插入非天然氨基酸或新的化学功能。有研究报道了一种化学合成荧光标记的 α- 银环蛇毒素的方法，通过将全长肽设计为在氨基末端包含一个炔基功能，然后通过三步连续的基于酰肼的肽片段偶联反应合成 α- 银环蛇毒素。在完成氧化折叠后，通过点击化学将叠氮修饰的 Cy5 荧光团偶联到毒素上。还有研究报道了一种结合 Fmoc - SPPS 和基于肽酰肼的连接策略合成 α - 银环蛇毒素的新方法，该两段连接方法可实现 α - 银环蛇毒素类似物的高效合成。 ◦ 基因克隆与表达：利用 SMART 技术反转录合成银环蛇毒腺 cDNA，可克隆并测定 α- 银环蛇毒素基因。研究人员曾得到 14 种 mRNA 序列，并将其中一种新的 α- 银环蛇毒素基因亚克隆到原核表达载体 pQE30a 和 pGEX - 4T - 1 中，在大肠杆菌中通过 IPTG 诱导表达。其中带有 GST 融合蛋白的重组质粒 α - BgTX (P22 - A31)/pGEX - 4T - 1 在 BL21 菌株中得到高效表达，表达量占菌总蛋白的 30%，可溶形式存在的融合蛋白大于 25% 。也有研究设计并人工合成引物，对重组质粒 pMD - α - BGT 进行 PCR 扩增获得 α - BGT 基因，构建融合基因表达载体 pGEX - α - BGT，转化大肠杆菌 BL21 (DE3) 进行 IPTG 诱导表达，表达产物经分析在约 34 ku 处可见明显的外源蛋白质表达带，表达量约占细菌总蛋白的 32.6%，且融合表达蛋白与天然 α - BGT 标准品具有相似的抗原性。 2. 相关研究案例 ◦ 在细胞研究中的应用：有研究通过自动膜片钳记录，证实了荧光合成的 α- 银环蛇毒素对烟碱型受体具有预期的纳摩尔亲和力，并且该荧光标记的 α- 银环蛇毒素可被模拟 α- 银环蛇毒素结合位点的 20 聚体肽取代，同时通过共聚焦显微镜观察到 TE671 细胞可以被荧光毒素标记，且这种标记可被 20 聚体竞争肽部分取代，表明合成的荧光标记 α- 银环蛇毒素保留了与肌肉烟碱型受体结合的优良特性。 动物实验中的应用：在观察电针足三里对术后大鼠腹腔粘连组织血管内皮生长因子（VEGF）表达影响的实验中，造模后注射 α- 银环蛇毒素作为实验分组之一，用于探讨电针足三里发挥抗炎作用的机制。实验结果表明阻断胆碱能受体 α7 亚基后施行电针足三里，组织 VEGF 表达无明显降低，提示其发挥抗炎机制与胆碱能抗炎通路有关。 |
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