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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接产物转化涂板问题
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dudu1161

银虫 (小有名气)

[交流] 连接产物转化涂板问题

大家好！我的连接产物转化后，涂在有氨苄抗性的固体培养基上，37℃培养18h后，一个板上只长了6个小菌落，请虫友们指点一下，我需要继续培养一下吗？因为我打算挑菌摇过夜后提质粒，感觉菌落太小了，怕摇不出来，谢谢大家！
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Stop walking today and you will have to run tomorrow!
1楼 2009-11-06 15:33:38
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):您真是热心人 而且懂的知识也很多 向您致敬！ 11-6 16:17
可以继续培养嘛，建议你给这六个菌落做个记号 以后再张出来的可能会是假阳性。
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可以用QQ找我……
2楼2009-11-06 15:42:32
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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不要害怕出长不出来，没有关系的啊，直接挑菌摇上
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3楼2009-11-06 15:57:30
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-6 16:18
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-6 15:57:
不要害怕出长不出来，没有关系的啊，直接挑菌摇上

用这六个小菌做个菌落PCR鉴定一下，然后再放到培养箱中培养，再将验证正确的接LB抽质粒。直接接LB然后抽质粒酶切验证也是可以的。
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4楼2009-11-06 16:04:15
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zier1011

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-6 16:54
你培养多长时间了？如果你做的是大肠杆菌转化，不妨在培养几个小时，到晚上菌落大些了，你在挑菌做液体培养，明天正好提质粒
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花还香香的
5楼2009-11-06 16:51:34
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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★
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Originally posted by dudu1161 at 2009-11-6 15:33:
大家好！我的连接产物转化后，涂在有氨苄抗性的固体培养基上，37℃培养18h后，一个板上只长了6个小菌落，请虫友们指点一下，我需要继续培养一下吗？因为我打算挑菌摇过夜后提质粒，感觉菌落太小了，怕摇不出来，谢 ...

养了18个小时还是很小的话，感觉不太正常啊，据经验多数是假的，除非你用的是XL1-Blue这个菌株，这个菌株长得稍慢，如果是大肠杆菌其他菌株的话，多数是假阳性，你可以做个菌落PCR试试看，将菌落稀释在10ul水里面，然后取4微升做实验PCR，剩下的放冰山保存到晚上，等PCR结果出来，取阳性的放LB里面养上，关于剩下的稀释在水里的菌保存问题，有人放-20度保存，有人4度 保存，我直接就放在桌子上，过10个小时再培养，没事，菌没那么容易就死
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6楼2009-11-06 17:03:00
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dudu1161

银虫 (小有名气)
多谢大家的热心解答，今晚看到大家的回帖感觉心里很温暖，多谢虫友们，因为最近正好有事，所以现在才迟迟给大家回，谢谢大家！
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Stop walking today and you will have to run tomorrow!
7楼2009-11-08 01:08:16
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dudu1161

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-6 17:03:

养了18个小时还是很小的话，感觉不太正常啊，据经验多数是假的，除非你用的是XL1-Blue这个菌株，这个菌株长得稍慢，如果是大肠杆菌其他菌株的话，多数是假阳性，你可以做个菌落PCR试试看，将菌落稀释在10ul水里 ...

谢谢您的指点，我是直接用连接产物涂板了，没有放在LB培养基里摇一小时再涂，都怪自己没好好查阅文献，懂得太少了，谢谢您！
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Stop walking today and you will have to run tomorrow!
8楼2009-11-08 01:12:43
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dudu1161

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-6 16:51:
你培养多长时间了？如果你做的是大肠杆菌转化，不妨在培养几个小时，到晚上菌落大些了，你在挑菌做液体培养，明天正好提质粒

您好！培养了18个小时，我做的大肠杆菌转化，谢谢您的解答！
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Stop walking today and you will have to run tomorrow!
9楼2009-11-08 01:15:02
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dudu1161

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-11-6 15:42:
可以继续培养嘛，建议你给这六个菌落做个记号 以后再张出来的可能会是假阳性。

好的，谢谢您，因为我是新手，所以很多都是请教的师姐，一般师姐培养的话都不会超过16个小时的，呵呵，多谢啦
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Stop walking today and you will have to run tomorrow!
10楼2009-11-08 01:16:34
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