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dudu1161

银虫 (小有名气)

[交流] 连接产物转化涂板问题

大家好!我的连接产物转化后,涂在有氨苄抗性的固体培养基上,37℃培养18h后,一个板上只长了6个小菌落,请虫友们指点一下,我需要继续培养一下吗?因为我打算挑菌摇过夜后提质粒,感觉菌落太小了,怕摇不出来,谢谢大家!
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Stop walking today and you will have to run tomorrow!
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):您真是热心人 而且懂的知识也很多 向您致敬! 11-6 16:17
可以继续培养嘛,建议你给这六个菌落做个记号 以后再张出来的可能会是假阳性。
可以用QQ找我……
2楼2009-11-06 15:42:32
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不要害怕出长不出来,没有关系的啊,直接挑菌摇上
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-11-06 15:57:30
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-6 16:18
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-6 15:57:
不要害怕出长不出来,没有关系的啊,直接挑菌摇上

用这六个小菌做个菌落PCR鉴定一下,然后再放到培养箱中培养,再将验证正确的接LB抽质粒。直接接LB然后抽质粒酶切验证也是可以的。
4楼2009-11-06 16:04:15
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zier1011

木虫 (著名写手)


amisking(金币+1,VIP+0): 11-6 16:54
你培养多长时间了?如果你做的是大肠杆菌转化,不妨在培养几个小时,到晚上菌落大些了,你在挑菌做液体培养,明天正好提质粒
花还香香的
5楼2009-11-06 16:51:34
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gyesang

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优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by dudu1161 at 2009-11-6 15:33:
大家好!我的连接产物转化后,涂在有氨苄抗性的固体培养基上,37℃培养18h后,一个板上只长了6个小菌落,请虫友们指点一下,我需要继续培养一下吗?因为我打算挑菌摇过夜后提质粒,感觉菌落太小了,怕摇不出来,谢 ...

养了18个小时还是很小的话,感觉不太正常啊,据经验多数是假的,除非你用的是XL1-Blue这个菌株,这个菌株长得稍慢,如果是大肠杆菌其他菌株的话,多数是假阳性,你可以做个菌落PCR试试看,将菌落稀释在10ul水里面,然后取4微升做实验PCR,剩下的放冰山保存到晚上,等PCR结果出来,取阳性的放LB里面养上,关于剩下的稀释在水里的菌保存问题,有人放-20度保存,有人4度 保存,我直接就放在桌子上,过10个小时再培养,没事,菌没那么容易就死
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6楼2009-11-06 17:03:00
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dudu1161

银虫 (小有名气)

多谢大家的热心解答,今晚看到大家的回帖感觉心里很温暖,多谢虫友们,因为最近正好有事,所以现在才迟迟给大家回,谢谢大家!
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7楼2009-11-08 01:08:16
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dudu1161

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-6 17:03:

养了18个小时还是很小的话,感觉不太正常啊,据经验多数是假的,除非你用的是XL1-Blue这个菌株,这个菌株长得稍慢,如果是大肠杆菌其他菌株的话,多数是假阳性,你可以做个菌落PCR试试看,将菌落稀释在10ul水里 ...

谢谢您的指点,我是直接用连接产物涂板了,没有放在LB培养基里摇一小时再涂,都怪自己没好好查阅文献,懂得太少了,谢谢您!
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8楼2009-11-08 01:12:43
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dudu1161

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-6 16:51:
你培养多长时间了?如果你做的是大肠杆菌转化,不妨在培养几个小时,到晚上菌落大些了,你在挑菌做液体培养,明天正好提质粒

您好!培养了18个小时,我做的大肠杆菌转化,谢谢您的解答!
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9楼2009-11-08 01:15:02
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dudu1161

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-11-6 15:42:
可以继续培养嘛,建议你给这六个菌落做个记号 以后再张出来的可能会是假阳性。

好的,谢谢您,因为我是新手,所以很多都是请教的师姐,一般师姐培养的话都不会超过16个小时的,呵呵,多谢啦
Stop walking today and you will have to run tomorrow!
10楼2009-11-08 01:16:34
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