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夏末～易科

新虫 (小有名气)

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[交流] HE染色模糊不清怎么办？

一、脱蜡不彻底
1. 原因：烤片温度/时间不足、二甲苯脱蜡时间过短或试剂失效。
2. 解决方法：提高烤片温度（60-65℃）或延长烤片时间至1-2小时。
更换新鲜二甲苯，延长脱蜡时间（建议每次脱蜡10-15分钟）。
检查乙醇脱水梯度，避免残留二甲苯影响后续染色。
二、脱水不完全或透明不良
1. 原因：低浓度乙醇停留时间过长、高浓度乙醇时间不足，导致水分残留或透明不彻底。
2. 解决方法：优化脱水流程：低浓度乙醇（如70%、80%）停留时间缩短（1-2分钟），高浓度乙醇（95%、100%）延长至3-5分钟。
重新脱水透明：若已封片，可移除盖玻片，用二甲苯溶解封固剂后，重新进行脱水、透明处理。
三、组织固定不良
1. 原因：固定不及时、固定液浓度不足或体积过少，导致组织自溶或渗透不均（如淋巴结中央发灰）。
2. 解决方法：确保固定液为4%中性甲醛，体积为标本的4-5倍，大组织需剖开固定。对致密组织（如淋巴结）可先用无水乙醇-乙醚混合液预处理5-10分钟，再补充媒染。
四、切片质量缺陷
1. 原因：切片厚薄不均、刀痕、气泡或卷曲。
2. 解决方法：检查切片刀角度（建议5°）和锋利度，避免切片过厚（推荐3-5μm）
制片时避免手抖或设备松动，确保切片平整无气泡。
五、染色与分化异常
1. 原因：苏木素过度氧化或分化时间不足，导致核质对比差。
伊红染色后脱水不彻底，残留水分导致雾化。
2. 解决方法：
更换新鲜苏木素，染色后充分蓝化（流水冲洗或弱碱性溶液处理）。
伊红染色后严格脱水，避免低浓度乙醇停留过久导致褪色。
六、其他注意事项
试剂质量：定期更换梯度乙醇和二甲苯，避免试剂污染或失效。
环境控制：室温低于20℃时，需延长苏木素染色时间或预热染液。

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1楼 2025-04-18 14:11:31

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