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森淼658

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[交流] 【求助】总黄酮含量测定问题

最近想进行一个中药的总黄酮含量测定，应用经典的亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法，对照品用芦丁，在样品测定时空白溶液用空白试剂还是用药材原液。芦丁用多大浓度的乙醇溶解，样品的溶解试剂也和芦丁的溶解试剂一致吗。不一致影响大吗？谢谢各位高手！

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总黄酮

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这世界并不在乎你的自尊，他期望你在自我感觉良好之前有所成就。

1楼2009-11-06 08:41:09

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ddw888

金虫 (小有名气)

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★ ★
森淼658(金币+1):谢谢参与
ynmyx(金币+1,VIP+0):谢谢您的热心解惑！！ 11-6 08:48

空白用溶剂，不用样品。以下供参考。样品溶剂应与对照品一致，影响视波长长短而定。波长越长影响越小。
总黄酮  对照品溶液的制备  精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品200mg，置100ml量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使混匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV B)，在500nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法  取本品粗粉约1g，于60℃干燥6小时，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚120ml，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移置100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg)，计算，即得。