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ELISA实验：科研小白也能轻松上手
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做生物实验的时候，是不是经常听到“ELISA”这个词？今天就来给大家唠唠ELISA实验的那些事儿，让你从科研小白秒变实验达人！ 一、ELISA是个啥？ ELISA（酶联免疫吸附测定）是分子生物学里的“超级侦探”，它能帮你检测大分子抗原和特异性抗体。简单来说，就是利用抗原抗体的特异性结合，通过酶标记的抗体或抗原来检测目标物质。它的优点是快速、灵敏、简便，而且结果超容易读取！ 二、ELISA实验的原理：揭秘“侦探”的工作方式 ELISA实验的原理其实很简单，就像是给抗原抗体反应搭建了一个“舞台”：固相载体：把抗原或抗体固定在固相载体（比如聚苯乙烯微孔板）上，让它们保持免疫活性。这就像是给抗原抗体准备了一个“家”。酶标记：把抗原或抗体和酶连接起来，形成酶标抗原或抗体。这样，抗原抗体反应不仅保留了免疫活性，还多了酶的“超能力”。反应与检测：加入待测样本，让抗原抗体反应在固相载体上进行。最后通过酶催化底物显色，根据颜色深浅就能判断目标物质的浓度啦！ 三、ELISA实验的四种方法： 总有一款适合你直接法ELISA把抗原稀释后包被到固相载体上，加入酶标抗体，孵育后显色。这种方法简单直接，但灵敏度有限，只能检测酶标记的分子。间接法ELISA主要用来检测抗体。先将抗原包被在微孔板上，加入待测样本，再加入酶标二抗，最后显色。这种方法灵敏度高，适合检测病原体，帮助诊断传染病。夹心法ELISA这是最常用的方法之一。先将抗体固定在微孔板上，加入待测样本，再加入酶标抗体，最后显色。这种方法适合检测大分子抗原，结果超灵敏！竞争法ELISA适合检测小分子抗原。先把抗体固定在微孔板上，加入酶标抗原和待测抗原的混合液，最后显色。这种方法灵敏度高，适合检测激素和药物等小分子。 四、ELISA实验常见问题及解决方法 没有条带检查试剂是否过期或加样是否出错，确保反应体系完整。确认抗原或抗体是否正确，是否存在特殊结构导致结合失败。优化实验条件，确保抗原抗体能特异性结合。非特异性条带检查反应体系是否被污染，确保操作环境无菌。优化抗原或抗体的浓度，减少非特异性结合。调整孵育时间和温度，确保反应条件最佳。结果不灵敏检查酶标抗体的活性，必要时更换新的试剂。增加孵育时间，确保反应充分进行。提高样本浓度，确保有足够的目标物质参与反应。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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