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llzhang2012

[交流] 克隆基因全长引物设计问题已有9人参与

已知一序列全长,如何根据此序列设计引物克隆出全长,我是新手,麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤,最近实验急需,非常感谢!!!
  我以前克隆过片段,没有做过全长,引物设计的一些基本原则都已了解,但是设计全长引物一点都不懂,劳烦各位,谢谢!
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2009-11-6 16:22:

请教一个问题,我们实验室的载体是已经线性化得,有T尾,一般PCR产物会有A尾,不加酶切位点直接连可以吗?我只需要连接好了验证一下送出去测序

但是你P这个基因的时候必须是要保证这个酶是高保真的,如果这个高保真的聚合酶能加A的话就可以直接连。还有就是你这个载体可以直接测序吗?测序之后你的表达什么的也是用的这个载体吗?
12楼2009-11-06 16:40:04
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xiangao

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从ATG开始设计上游引物   TAA处设计下游引物
3楼2009-11-04 16:22:43
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小白3521

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物上要加酶切位点和保护碱基
4楼2009-11-04 17:02:39
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llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-4 17:02:
引物上要加酶切位点和保护碱基

具体要怎样加啊?
5楼2009-11-05 15:31:25
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