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lliumei912

[交流] 荧光显微镜看细胞内源荧光

本人化学系的,生物实验不是很精通,做了细胞标了发光纳米颗粒,用蓝光激发,曝光时间要1S才可以看到绿色的荧光,且与细胞的位置对应,但是用同样条件去看对照细胞(未加发光纳米颗粒)也一样发绿色荧光,这样是不是拍到的是细胞本身的内源荧光啊???而不是纳米颗粒的荧光???
请各位大侠帮忙解答一下。
谢谢!!

[ Last edited by 1949stone on 2009-11-4 at 10:55 ]
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-11-5 11:54:
加到什么细胞上去了??
普通哺乳动物细胞?
这怎么可能会有内源的荧光物质呢?

是肝癌细胞,因为没有加纳米材料的细胞也拍到了绿色的光了,所以我觉得应该是内源荧光,只要把曝光时间加长,我调曝光时间调到1S就看到内源荧光了
8楼2009-11-07 10:37:50
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查看全部 8 个回答

lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢解答 很热心 11-4 10:55
lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢! 11-4 16:34
那么对照跟处理组是否有差别呢?(比如分布,荧光强度)很多细胞本身都会有本底荧光,但一般都不是很强。另外请楼主说明你的纳米颗粒上连的是什么荧光染料,不同的荧光染料都有确定的激发光和发射光波长,请尽量在波长范围内选择滤片。激光共聚焦显微镜能观察更精细的细节也能部分消除本底。

另外很好奇楼主是怎么做出发光纳米颗粒的?是什么样的纳米?我也想做。
2楼2009-11-04 10:34:34
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢! 11-4 16:34
引用回帖:
Originally posted by lliumei912 at 2009-11-4 09:30:
本人化学系的,生物实验不是很精通,做了细胞标了发光纳米颗粒,用蓝光激发,曝光时间要1S才可以看到绿色的荧光,且与细胞的位置对应,但是用同样条件去看对照细胞(未加发光纳米颗粒)也一样发绿色荧光,这样是不 ...

就是由内源荧光啊。
这需要你调调背景啊。

另外,你从开始设计纳米颗粒的时候,就要注意选择 避开细胞本身的绿色荧光啊,应该采用红色荧光的!!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-11-04 15:10:35
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2009-11-4 10:34:
那么对照跟处理组是否有差别呢?(比如分布,荧光强度)很多细胞本身都会有本底荧光,但一般都不是很强。另外请楼主说明你的纳米颗粒上连的是什么荧光染料,不同的荧光染料都有确定的激发光和发射光波长,请尽量在 ...

我知道细胞本身有本底荧光,可是,我想知道,用倒置荧光显微镜是否可以观察到细胞的本底荧光???我问了2个博士师姐,她们都说应该看不到的,但是我的对照样也要荧光,所以现在不知道怎样。
4楼2009-11-04 16:36:59
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