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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 荧光显微镜看细胞内源荧光
汕头大学海洋科学接受调剂
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lliumei912

[交流] 荧光显微镜看细胞内源荧光

本人化学系的，生物实验不是很精通，做了细胞标了发光纳米颗粒，用蓝光激发，曝光时间要1S才可以看到绿色的荧光，且与细胞的位置对应，但是用同样条件去看对照细胞（未加发光纳米颗粒）也一样发绿色荧光，这样是不是拍到的是细胞本身的内源荧光啊？？？而不是纳米颗粒的荧光？？？
请各位大侠帮忙解答一下。
谢谢！！

[ Last edited by 1949stone on 2009-11-4 at 10:55 ]
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1楼 2009-11-04 09:30:28
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-11-5 11:54:
加到什么细胞上去了？？
普通哺乳动物细胞？
这怎么可能会有内源的荧光物质呢？

是肝癌细胞，因为没有加纳米材料的细胞也拍到了绿色的光了，所以我觉得应该是内源荧光，只要把曝光时间加长，我调曝光时间调到1S就看到内源荧光了
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8楼2009-11-07 10:37:50
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢解答 很热心 11-4 10:55
lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢！ 11-4 16:34
那么对照跟处理组是否有差别呢？（比如分布，荧光强度）很多细胞本身都会有本底荧光，但一般都不是很强。另外请楼主说明你的纳米颗粒上连的是什么荧光染料，不同的荧光染料都有确定的激发光和发射光波长，请尽量在波长范围内选择滤片。激光共聚焦显微镜能观察更精细的细节也能部分消除本底。

另外很好奇楼主是怎么做出发光纳米颗粒的？是什么样的纳米？我也想做。
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2楼2009-11-04 10:34:34
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢！ 11-4 16:34
引用回帖:
Originally posted by lliumei912 at 2009-11-4 09:30:
本人化学系的，生物实验不是很精通，做了细胞标了发光纳米颗粒，用蓝光激发，曝光时间要1S才可以看到绿色的荧光，且与细胞的位置对应，但是用同样条件去看对照细胞（未加发光纳米颗粒）也一样发绿色荧光，这样是不 ...

就是由内源荧光啊。
这需要你调调背景啊。

另外，你从开始设计纳米颗粒的时候，就要注意选择 避开细胞本身的绿色荧光啊，应该采用红色荧光的！！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-11-04 15:10:35
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2009-11-4 10:34:
那么对照跟处理组是否有差别呢？（比如分布，荧光强度）很多细胞本身都会有本底荧光，但一般都不是很强。另外请楼主说明你的纳米颗粒上连的是什么荧光染料，不同的荧光染料都有确定的激发光和发射光波长，请尽量在 ...

我知道细胞本身有本底荧光，可是，我想知道，用倒置荧光显微镜是否可以观察到细胞的本底荧光？？？我问了2个博士师姐，她们都说应该看不到的，但是我的对照样也要荧光，所以现在不知道怎样。
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4楼2009-11-04 16:36:59
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