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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 荧光显微镜看细胞内源荧光
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lliumei912

[交流] 荧光显微镜看细胞内源荧光

本人化学系的，生物实验不是很精通，做了细胞标了发光纳米颗粒，用蓝光激发，曝光时间要1S才可以看到绿色的荧光，且与细胞的位置对应，但是用同样条件去看对照细胞（未加发光纳米颗粒）也一样发绿色荧光，这样是不是拍到的是细胞本身的内源荧光啊？？？而不是纳米颗粒的荧光？？？
请各位大侠帮忙解答一下。
谢谢！！

[ Last edited by 1949stone on 2009-11-4 at 10:55 ]
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1楼 2009-11-04 09:30:28
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢解答 很热心 11-4 10:55
lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢！ 11-4 16:34
那么对照跟处理组是否有差别呢？（比如分布，荧光强度）很多细胞本身都会有本底荧光，但一般都不是很强。另外请楼主说明你的纳米颗粒上连的是什么荧光染料，不同的荧光染料都有确定的激发光和发射光波长，请尽量在波长范围内选择滤片。激光共聚焦显微镜能观察更精细的细节也能部分消除本底。

另外很好奇楼主是怎么做出发光纳米颗粒的？是什么样的纳米？我也想做。
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2楼2009-11-04 10:34:34
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢！ 11-4 16:34
引用回帖:
Originally posted by lliumei912 at 2009-11-4 09:30:
本人化学系的，生物实验不是很精通，做了细胞标了发光纳米颗粒，用蓝光激发，曝光时间要1S才可以看到绿色的荧光，且与细胞的位置对应，但是用同样条件去看对照细胞（未加发光纳米颗粒）也一样发绿色荧光，这样是不 ...

就是由内源荧光啊。
这需要你调调背景啊。

另外，你从开始设计纳米颗粒的时候，就要注意选择 避开细胞本身的绿色荧光啊，应该采用红色荧光的！！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-11-04 15:10:35
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2009-11-4 10:34:
那么对照跟处理组是否有差别呢？（比如分布，荧光强度）很多细胞本身都会有本底荧光，但一般都不是很强。另外请楼主说明你的纳米颗粒上连的是什么荧光染料，不同的荧光染料都有确定的激发光和发射光波长，请尽量在 ...

我知道细胞本身有本底荧光，可是，我想知道，用倒置荧光显微镜是否可以观察到细胞的本底荧光？？？我问了2个博士师姐，她们都说应该看不到的，但是我的对照样也要荧光，所以现在不知道怎样。
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4楼2009-11-04 16:36:59
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-11-4 15:10:



就是由内源荧光啊。
这需要你调调背景啊。

另外，你从开始设计纳米颗粒的时候，就要注意选择 避开细胞本身的绿色荧光啊，应该采用红色荧光的！！

怎样调背景啊？？？你的意思是，用倒置荧光显微镜，可以观察到细胞的内源荧光的？？？
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5楼2009-11-04 16:37:57
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
lliumei912(金币+1,VIP+0):谢谢！ 11-7 10:35
是不是有本底荧光，本底荧光到底有多强这个跟不同的细胞，甚至同一细胞的培养状态都有关系。有次跟同学交流，他告诉我他们的细胞如果培养状态不好的时候就会有比较多的本底荧光。另外还是说：跟用什么显微镜没有关系，跟滤片关系很大，共聚焦显微镜原理不同所以得到的结果更好。如果你做的结果需要发文章建议用共聚焦显微镜拍摄，这样的结果比较容易得到认可。

另外楼主是怎么做的发光纳米的？能交流一下吗？QQ173293769
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6楼2009-11-05 10:58:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
加到什么细胞上去了？？
普通哺乳动物细胞？
这怎么可能会有内源的荧光物质呢？
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7楼2009-11-05 11:54:30
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lliumei912

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-11-5 11:54:
加到什么细胞上去了？？
普通哺乳动物细胞？
这怎么可能会有内源的荧光物质呢？

是肝癌细胞，因为没有加纳米材料的细胞也拍到了绿色的光了，所以我觉得应该是内源荧光，只要把曝光时间加长，我调曝光时间调到1S就看到内源荧光了
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8楼2009-11-07 10:37:50
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