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fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] 寻求我的PCR反应不稳定的原因

各位,最近做PCR有些不顺利,用同样的东西,总是有时候P出来,有时候P出不来。我用的体系是25微升的,具体为:ddH2O 17.5,10*buffer 2.5,dNTP 2,F引物0.5, R引物0.5,rTaq酶0.125,模板是2微升的口腔细菌基因组DNA。我用的引物是细菌16S rDNA通用引物,口腔细菌基因组DNA是用“细菌基因组DNA提取试剂盒”提的,就是用无菌棉签刮几下口腔内壁,然后用试剂盒提。我怀疑是不是模板的浓度太低啊,因为我的marker每条带约是50ng的DNA,而成功P出来的时候,目的产物估计最多的也就100ng(如图)。各位帮俺看看是啥毛病导致我的PCR反应如此不稳定的吧,多谢!

[ Last edited by amisking on 2009-11-2 at 08:39 ]
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dNTP、引物、rTaq酶的量都不多,跑完没有引物剩余,酶0.5,循环次数增加
但愿人长久
2楼2009-11-02 08:37:57
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
100ng/5vl吧,还是不错吧~每管都不一致,你是分开加的样?还是加了分装的?分装的话可能是没混匀。
修炼ing,当虫仙……
3楼2009-11-02 09:07:56
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