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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 寻求我的PCR反应不稳定的原因
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fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] 寻求我的PCR反应不稳定的原因

各位，最近做PCR有些不顺利，用同样的东西，总是有时候P出来，有时候P出不来。我用的体系是25微升的，具体为：ddH2O 17.5，10*buffer 2.5，dNTP 2，F引物0.5， R引物0.5，rTaq酶0.125，模板是2微升的口腔细菌基因组DNA。我用的引物是细菌16S rDNA通用引物，口腔细菌基因组DNA是用“细菌基因组DNA提取试剂盒”提的，就是用无菌棉签刮几下口腔内壁，然后用试剂盒提。我怀疑是不是模板的浓度太低啊，因为我的marker每条带约是50ng的DNA，而成功P出来的时候，目的产物估计最多的也就100ng（如图）。各位帮俺看看是啥毛病导致我的PCR反应如此不稳定的吧，多谢！

[ Last edited by amisking on 2009-11-2 at 08:39 ]
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1楼 2009-11-01 21:32:21
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dNTP、引物、rTaq酶的量都不多，跑完没有引物剩余，酶0.5，循环次数增加
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但愿人长久
2楼2009-11-02 08:37:57
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
100ng/5vl吧，还是不错吧~每管都不一致，你是分开加的样？还是加了分装的？分装的话可能是没混匀。
赞一下(1人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2009-11-02 09:07:56
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