应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于测序，空载体
151/2返回列表12下一页
查看: 1273  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

zhouxw125

铁虫 (初入文坛)

[交流] 关于测序，空载体

大家好！不知道有没有人遇到过这样的情况呢？

我做了连接转化后，先是用自己的引物做了菌液PCR检测，结果假阳性比较多，测出的都是空载体。然后我又用M13通用引物做了菌液pcr检测阳性克隆，送至华大基因测序，结果现在测出的序列都是载体上的序列，完全不是我要的结果，跟第一次差不多。有没有人遇到到过同样的情况呢，分享一下经验

我的目的基因片段是600bp左右，测序的几个结果都是1000多个bp，根本不是我要的序列

[ Last edited by amisking on 2009-11-1 at 14:27 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-01 14:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑罕

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 11-1 16:21
你的连接有问题
1、找人检查你的实验方案是否有问题
2、检查你用的酶是否有效
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2009-11-01 14:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 11-1 16:21
呵呵，XW啊，实验出问题了才来小木虫逛啊。
还是那个原因。
菌液PCR一定要记得做阴性对照。
赞一下(21人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2009-11-01 15:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱吃水果

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-1 16:22
用基因特异引物检测室空载体那肯定就是空的了
没必要还用M13，更不要测序
重新挑克隆
不行只能重做连接转化
赞一下(21人) 回复此楼
爱学习！爱运动！我爱吃水果！o(∩_∩)o...哈哈
4楼2009-11-01 16:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 11-1 17:09
1、M13通用引物做了菌液pcr检测阳性克隆后又用你自己的引物检测过了吗？
2、测出来的1000多bp是一个测序反应的长度，你可以再反向比对下看看有没有正确的。
赞一下(21人) 回复此楼
5楼2009-11-01 16:58:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 黑罕 at 2009-11-1 14:37:
你的连接有问题
1、找人检查你的实验方案是否有问题
2、检查你用的酶是否有效

恩，我现在正在改进实验方法，重新做一遍试试，谢谢
赞一下 回复此楼
6楼2009-11-05 19:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-11-1 15:17:
呵呵，XW啊，实验出问题了才来小木虫逛啊。
还是那个原因。
菌液PCR一定要记得做阴性对照。

哈哈，S啊，你是天天来啊，我也经常来看帖子地
赞一下 回复此楼
7楼2009-11-05 19:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 我爱吃水果 at 2009-11-1 16:17:
用基因特异引物检测室空载体那肯定就是空的了
没必要还用M13，更不要测序
重新挑克隆
不行只能重做连接转化

不一定啊，用基因特异性引物做检测也会有误的,原因跟M13一样。
“PCR只能说明菌液里有你的目的菌，但PCR的敏感性，只要有很微量的目的菌就可以P的出来，但不代表里面就没有其他的菌了，所以说菌液可能不纯，里面只有少量的阳性菌。P是P的出来，但酶切就出不来”
赞一下 回复此楼
8楼2009-11-05 19:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-1 16:58:
1、M13通用引物做了菌液pcr检测阳性克隆后又用你自己的引物检测过了吗？
2、测出来的1000多bp是一个测序反应的长度，你可以再反向比对下看看有没有正确的。

恩，用我自己的引物和M13都做了检测，两个结果差不多，只有一个不一样
我再去看一下中间的序列，这个我还真没有分析咯
谢谢你，非常感谢
赞一下 回复此楼
9楼2009-11-05 19:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是连接引物出的问题啊？？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-11-05 19:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhouxw125 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 材料专硕找调剂 +3 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 0703化学求调剂 +4 奶油草莓. 2026-03-22 5/250 2026-03-23 19:37 by pswait
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 10/500 2026-03-23 10:41 by Iveryant
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭