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xuaner12

[交流] 【求助】FITC 的标记

大家好。我想问一下关于FITC 标记氨基酸的具体的实验步骤?谢谢啊!急 急 急!
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liyh9199

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碱性磷酸酶(AP)标记

碱性磷酸酶(AP)用于标记抗体,常用戊二醛一步法,将酶和单抗混合,再加入适量戊二醛,使酶和抗体蛋白的NH2分别与两个醛基结合,制备成结合物。该法简便,但所得产物不均一,抗体活性损失大,酶标记率低。其程序如下:

(1)将5mg AP加入1ml抗体溶液(2mg/ml)中溶解,装入透析袋,于4℃对0.01mol/L PH7.2 PBS透析18小时,换液三次。

(2)加入2.5%戊二醛20ul,室温作用1-2小时,4℃对PBS透析过夜,其间换液三次。

(3)换用0.05mol/L PH8.0 Tris-HCl缓冲液透析,4℃过夜,换液三次。

(4)取出标记抗体,用含1%BSA的Tris-HCl缓冲液稀释至4ml,即为AP标记物原液。

(5)每毫升中加入0.4ml甘油,小量分装,保存备用。

给你参考把
2楼2009-10-31 22:09:51
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xuaner12

引用回帖:
Originally posted by liyh9199 at 2009-10-31 22:09:
碱性磷酸酶(AP)标记

碱性磷酸酶(AP)用于标记抗体,常用戊二醛一步法,将酶和单抗混合,再加入适量戊二醛,使酶和抗体蛋白的NH2分别与两个醛基结合,制备成结合物。该法简便,但所得产物不均一,抗体活性损 ...

谢谢啊。我还想问一下为标记的FITC怎么除去?
3楼2009-10-31 22:38:00
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