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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR刚开始扩的很好，后来就扩不出来了怎么回事？
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR刚开始扩的很好，后来就扩不出来了怎么回事？已有7人参与

第一次用的降落pcr,条带很清晰，跑了marker,确实是目的条带。可是仅仅隔了两天就死活扩不出来了！扩增条件和扩增体系都和两天前是一样的，酶是新的才用了几次不可能出问题的！也换了模板，换了电泳液和胶，也注意了混匀等细节还是p不出不来！
郁闷死了！
有没有有经验的指点一下？谢谢各位！

[ Last edited by amisking on 2010-8-14 at 22:28 ]
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1楼2009-10-30 20:46:36
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by goodwish at 2009-10-30 20:55:
很可能是引物出问题了。

引物不会降解那么快吧？用了没有几次，再说我这前后也就隔了两天。
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4楼2009-10-30 21:01:49
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by Entrez1110 at 2009-10-30 20:50:
引物有没有降解？

引物是否降解有办法测定吗？
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5楼2009-10-30 21:02:39
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yxx41 at 2009-11-2 09:19:
我以为是我太菜，原来也有和我一样菜的……
不行就像楼上说的整个推倒重来，不甘心就再试试。

13楼2009-11-02 15:23:55
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-11-2 09:36:
我只能说我也不知道原因
以前也遇到类似的情况，尝试很多，做后得出结论是多做几次，每天做一到两次，总会再出来的。。。

我也坚信会出来的！
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14楼2009-11-05 16:45:31
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by nocaackoei at 2009-11-6 21:01:
pcr仪器出问题了吧
或者检查一下程序的设定。

程序是原先的没有改动，仪器别人用的好好的呢。
我现在是全部重新来了。郁闷
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16楼2009-11-10 10:38:48
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by nql_sdau at 2009-11-10 13:17:
引物和PCR体系的药品都要分装1以防污染！再就是引物和TAq不要反复冻融！

引物是分装的还好说  但是酶没法分装啊  你们是怎么弄的？谢谢啊！
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20楼2009-11-10 15:28:29
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by changes at 2009-11-10 11:06:
换另一管引物试试，另外别人能扩增出条带吗？换个PCR仪试试。还有就是水的问题。

啊  水我没有换  好的 我换换看  谢谢啊
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21楼2009-11-10 15:29:27
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by 六妖妖 at 2009-11-10 11:16:
一般遇到这种事情，首先换酶。可以用其他人正在用，而且能做出结果的酶。虽然酶是新的，但不一定酶的质量就是好的。
然后是换模板。引物可以直接跑胶检测的。不知道你的引物稀释到怎样的情况。Touchdown是个不错 ...

谢谢  开始我觉得反正Touchdown做出来了 就不用再去摸退火了  现在觉得也不是这么回事  后面就会麻烦了
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22楼2009-11-10 15:32:13
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
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Originally posted by benben486 at 2009-11-11 13:53:
我也出现过这种情况，呵呵，我的办法是放两天再做，环境条件很重要，有的还是可以重新做出来的，但有的就没这么幸运，

天气越来越冷了  早知道就连着做下来了

看来我不够幸运啊
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25楼2009-11-11 14:21:33
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