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汕头大学海洋科学接受调剂
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seeker91

木虫 (文坛精英)


[交流] 关于拓扑异构酶应用与克隆的疑惑!!help!!

拓扑异构酶可以在不利用ATP的情况下顺利地切断和连接环状质粒,因此可以将此酶应用于基因克隆到质粒得过程,廉价而快速,Invitrogen 公司已将此方法商业化,可小生始终有一疑惑未能解开:当质粒被此酶切开口之后,在没有连接酶的情况下,基因片段是如何连接到质粒中去的?如何连接的?如何连接的?快,请各高手帮忙解决!!!

[ Last edited by amisking on 2009-10-30 at 22:36 ]
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by seeker91 at 2009-10-30 15:12:
拓扑异构酶可以在不利用ATP的情况下顺利地切断和连接环状质粒,因此可以将此酶应用于基因克隆到质粒得过程,廉价而快速,Invitrogen 公司已将此方法商业化,可小生始终有一疑惑未能解开:当质粒被此酶切开口之后, ...

拓扑异构酶不仅能够切开DNA链,很快就能够将其连接起来,是不是在连接之前如果你的目的片段刚好在切开的DNA中间的话就能够被连接起来呢?
2楼2009-10-30 22:33:19
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seeker91

木虫 (文坛精英)


引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-30 22:33:

拓扑异构酶不仅能够切开DNA链,很快就能够将其连接起来,是不是在连接之前如果你的目的片段刚好在切开的DNA中间的话就能够被连接起来呢?

拓扑酶在两个连续的转酶反应中断裂和重新连接DNA磷酸二脂键的骨架,在瞬时DNA断裂阶段,拓扑酶酪氨酸羟基于断裂处的一个DNA磷酸基之间形成共价DNA—酶断裂复合物中间体。中间体形成后,酶允许断开的DNA分离,为另外的单链或双链片断的通过开辟道路。只有这一点点解释了!
3楼2009-10-31 09:26:02
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9528

至尊木虫 (职业作家)

挺高深
古来圣贤皆寂寞,惟有饮者留其名。
4楼2009-11-01 22:29:31
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