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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于拓扑异构酶应用与克隆的疑惑！！help！！
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seeker91

木虫 (文坛精英)

[交流] 关于拓扑异构酶应用与克隆的疑惑！！help！！

拓扑异构酶可以在不利用ATP的情况下顺利地切断和连接环状质粒，因此可以将此酶应用于基因克隆到质粒得过程，廉价而快速，Invitrogen 公司已将此方法商业化，可小生始终有一疑惑未能解开：当质粒被此酶切开口之后，在没有连接酶的情况下，基因片段是如何连接到质粒中去的？如何连接的？如何连接的？快，请各高手帮忙解决！！！

[ Last edited by amisking on 2009-10-30 at 22:36 ]
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1楼 2009-10-30 15:12:03
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by seeker91 at 2009-10-30 15:12:
拓扑异构酶可以在不利用ATP的情况下顺利地切断和连接环状质粒，因此可以将此酶应用于基因克隆到质粒得过程，廉价而快速，Invitrogen 公司已将此方法商业化，可小生始终有一疑惑未能解开：当质粒被此酶切开口之后， ...

拓扑异构酶不仅能够切开DNA链，很快就能够将其连接起来，是不是在连接之前如果你的目的片段刚好在切开的DNA中间的话就能够被连接起来呢？
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2楼2009-10-30 22:33:19
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seeker91

木虫 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-30 22:33:

拓扑异构酶不仅能够切开DNA链，很快就能够将其连接起来，是不是在连接之前如果你的目的片段刚好在切开的DNA中间的话就能够被连接起来呢？

拓扑酶在两个连续的转酶反应中断裂和重新连接DNA磷酸二脂键的骨架，在瞬时DNA断裂阶段，拓扑酶酪氨酸羟基于断裂处的一个DNA磷酸基之间形成共价DNA—酶断裂复合物中间体。中间体形成后，酶允许断开的DNA分离，为另外的单链或双链片断的通过开辟道路。只有这一点点解释了！
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3楼2009-10-31 09:26:02
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9528

至尊木虫 (职业作家)
挺高深
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古来圣贤皆寂寞，惟有饮者留其名。
4楼2009-11-01 22:29:31
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