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xuqz005

金虫 (小有名气)

[交流] MDCK培养问题

一直在养MDCK细胞,但是老是出现问题,主要是消化不好的问题,刚开始时是用PBS洗两次后,胰酶加EDTA消化4-6min,然后直接用消化液吹下来后再加培养基DMEM去吹散,
现在的做法是用预热的消化液(胰酶加EDTA)去洗两次,每次约1min,然后加消化液37度孵育2min左右,弃消化液换培养基吹下来,再吹散。
主要问题是:第一种方法,细胞吹下来后容易成小团,吹不成单个,吹过度后第二天全漂了
                      第二种方法此问题也出现,而且不容易吹下来。
另,细胞传稀了,长了两天后,换个液,第二天细胞变圆了,也漂了。

困惑死了,细胞时好时坏,实验没法按时进行,养得自己快崩溃了,大部分人都说这个细胞很贱很容易养,少部分人说这个细胞很娇贵。唉,希望高手能指点迷津,谢谢了!!!
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fwks

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1、消化时间没掌握好,消化过度会伤害细胞,导致细胞成团,成活率低;消化不足则吹不下来,建议用胰酶覆盖细胞层的时候,不时对照灯光用肉眼观察,仔细留意是否有细胞层流下,一旦发现则马上加含有血清的培养基终止消化。离心除去消化液里的edta。
2、细胞传代不要太稀,否则也长不好。如果细胞容易飘起来,还有可能是培养液存放时间太了,导致培养液pH值变碱性了。
3楼2009-10-29 21:02:25
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jinlin

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):恭喜抢沙发,给个红包
先使劲顶一下再说。
2楼2009-10-29 19:36:09
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