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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR酶的选择
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陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] PCR酶的选择

各位，
    最近要做PCR,P完后与T载体连接，送出去测序，请问用什么酶比较好，有人告诉我高保真的TAQDNA聚合酶不能加A尾，但我们实验室的载体就是T-A连接的；
   还有一个问题，我后面要P一个接近7000bp的基因，请问要选什么酶和载体，一般的载体和酶上限就是3000bp了！
   不甚感激！！！
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1楼 2009-10-29 10:26:44
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message

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 10-29 13:11
可以用高保真的KOD酶或Pfu酶，但是需要加A
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2楼2009-10-29 10:35:12
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 10-29 13:11
你买个平端的载体，用pFU，7kb没问题的
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3楼2009-10-29 10:57:30
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LA Taq 就可以了，P出来有A.
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霉菌
4楼2009-10-29 10:57:34
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0): 10-29 13:11
3楼说的很好，可以直接选用LA TAQ,这个酶有末端转移酶活性，能加A，同时这个酶在扩增长片段时，特别是3Kb以上的片段时具有很高的保证性！你可以试下
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多点思维，多点idea
5楼2009-10-29 11:23:14
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陈思容

铜虫 (正式写手)
谢谢各位！
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6楼2009-10-29 14:09:37
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-10-29 10:57:
你买个平端的载体，用pFU，7kb没问题的

非常感谢，一般长度的基因的话选用什么酶比较好呢，要求高保真性，还能加A尾
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7楼2009-10-29 14:13:03
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humants

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by peng5053 at 2009-10-29 11:23:
3楼说的很好，可以直接选用LA TAQ,这个酶有末端转移酶活性，能加A，同时这个酶在扩增长片段时，特别是3Kb以上的片段时具有很高的保证性！你可以试下

请问我的目的基因有1kb用LA Taq，能达到高保真吗？我要求做出来测定酶活力。
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8楼2009-10-29 16:32:52
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)
ex-taq
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9楼2009-10-29 17:20:31
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smurfen

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by humants at 2009-10-29 16:32:



请问我的目的基因有1kb用LA Taq，能达到高保真吗？我要求做出来测定酶活力。

1kb一般都不会突变吧
要测taq酶的活力吗？
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Advances in Prevention of Thermal Runaway in Lithium-Ion Batteries
10楼2009-10-29 17:22:48
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