应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒共转化求助
51/1返回列表
查看: 2812  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者无难事将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

无难事

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒共转化求助 已有1人参与

大家好，我使用pET-28a与pET-22b两个质粒分别携带一个目的基因，然后共转化进BL21，双抗进行筛选。然后一个菌落的菌p我做了两管，1管是pET-28a通用引物+28a质粒上目的基因下游引物，另外1管是pET-22b通用引物+22b质粒上目的基因下游引物。都能p出来，但是诱导的时候发现只有一种蛋白表达，是什么原因呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2024-11-01 10:10:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无难事

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2024-11-03 13:34:59
怎么确认另外一种蛋白没有表达？  

（在双基因体系中不表达的蛋白）该蛋白单独能表达吗？

2,3，4,5个不同亚基都可以在大肠杆菌中共表达，可以用Duet质粒（一个质粒）

提供信息有限，有可能是小的蛋白过量表 ...

跑了SDS-PAGE看的，只有一种蛋白表达了
赞一下 回复此楼
7楼2024-11-04 16:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

chen5805

至尊木虫 (职业作家)

资深木虫
不是基因成功连接上表达载体鉴定完毕后都能表达的，基因表达是较复杂的过程，增大诱导剂量及诱导时间或者更换培养基试试~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2024-11-01 11:44:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无难事

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chen5805 at 2024-11-01 11:44:51
不是基因成功连接上表达载体鉴定完毕后都能表达的，基因表达是较复杂的过程，增大诱导剂量及诱导时间或者更换培养基试试~

您好，谢谢您的回答，我想知道会不会是这两个质粒的问题。不能同时在一个菌株里面表达。
赞一下 回复此楼
3楼2024-11-01 13:56:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen5805

至尊木虫 (职业作家)

资深木虫
我们之前是把构建好的不同的表达载体分别转化到表达菌中，没有试过不同的表达载体共同转化到同一种表达菌株中的情况，你可以做对比实验看看；

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2024-11-01 20:44:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:33 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:12 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
[有机交流] 科研求助 10+4 我吃一只鱼 2026-09-07 4/200 2026-09-10 08:32 by 0940628
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭