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阿瓜皮帽

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 vt 和vs分别是多少呀 vt是三毫升吗

抗氧化酶酶液提取
取0.5 g鲜样,加入2mL预冷的50 mM磷酸钾缓冲液(pH 7.8),在预冷的研钵中磨成匀浆,加入3mL冲洗研钵两次,致使最终体积为8mL;
于4?C下12,000 g离心15 min,上清液用于SODPODAPXCATGR酶活性和MDA含量的测定。
超氧化物歧化酶(SOD)(560nm)
【试剂】
NBT反应液:250mL磷酸钾缓冲液(50 mM,pH7.8)内含:
+0.4849g甲硫氨酸(13 mM,待完全溶解后再溶其他物质)
+0.01533gNBT(75 ?M)
+0.0073gEDTA (0.1 mM )
+0.000188g核黄素(2 ?M,测定前加入并进行试验)
【方法步骤】NBT法(氮蓝四唑光氧化还原法)
1. 2.9mLNBT反应液+100uL酶粗提液,两管对照(光照/黑暗),用0.1mL双蒸水替代酶提取液
2. 暗中对照管做空白调零,反应混合液在4000 1x条件下反应20 min以抑制NBT光化还原的50%为1个酶活性单位计算SOD活性。
3. 波长560nm处测定光对照管、测定管吸光值,根据以下公式测定SOD活性。
4.
(A0-AS)*Vt*60
计算
A0*0.5*FW*Vs*t
SOD活性(U.g-1FW.h-1)=

式中,A0:光下对照管吸光度;As:样品测定管吸光度;Vt:样品提取液总体积(mL);Vs:测定时取粗酶液量(mL); t: 显色反应光照时间(min);FW:样品鲜重(g)。

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