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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于提取酵母、真菌等线粒体的问题，请假各位大侠
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dyy丫

银虫 (初入文坛)

[交流] 关于提取酵母、真菌等线粒体的问题，请假各位大侠

我正在做提取酵母线粒体的实验，用的是GENMED真菌/酵母细胞线粒体分离（高纯）试剂盒，十次，1500块钱，我已经试过好几次了，没有一次成功的，而且这个试剂盒操作步骤也很多，做一次大概要一个白天那样，还没有做出结果；观察线粒体使用詹纳斯绿（Janus Green B）染色法，在油镜下观察，但是这个试剂本底就有一定的影响......
     在此，我想请教一下，有没有那位大侠用过这个试剂盒——GENMED真菌/酵母细胞线粒体分离（高纯）试剂盒，来提取线粒体的，想请教一下经验，是不是我哪个步骤做错了，还是其他原因，先谢谢啦

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-28 at 13:00 ]
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1楼 2009-10-28 10:52:26
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zier1011

木虫 (著名写手)
★
dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢啦 10-28 12:30
没有用过，也没有提取过线粒体，不过帮你顶顶，希望有人帮你，祝好运
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花还香香的
2楼2009-10-28 11:12:23
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foreverru

新虫 (小有名气)
★
dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢 10-29 16:21
提取线粒体时要多多注意提取过程中的大环境和小环境，这一点很重要！！！也就是用来提取的药剂浓度要适当。
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3楼2009-10-29 11:32:38
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★
dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢啦 10-29 16:19
建议用超速离心的方法分离获得，试剂盒的回收率会很低，另外你的酵母样品里面的线粒体含量也很重要（测个酶活试试），还有试剂盒提取的时候对时间的把握会很重要，因为你要求是完整的线粒体。另外试剂盒的批次也有不稳定的情况，总之，不能舍不得花钱哦
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可以用QQ找我……
4楼2009-10-29 12:11:58
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢 10-29 16:23
是不是试剂盒本身的问题
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5楼2009-10-29 15:01:51
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dyy丫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-10-29 12:11:
建议用超速离心的方法分离获得，试剂盒的回收率会很低，另外你的酵母样品里面的线粒体含量也很重要（测个酶活试试），还有试剂盒提取的时候对时间的把握会很重要，因为你要求是完整的线粒体。另外试剂盒的批次也有 ...

我就是想测一下线粒体里面的一个酶酶活，只有提到线粒体之后，破碎线粒体再进行酶活测定，试剂盒里面最后一步就是超速离心的，前面的都是菌体预处理：细胞壁破除，细胞裂解等等。我就是想问问有没有做提取线粒体实验的，还有用过这个试剂盒的，想讨教一下经验的
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6楼2009-10-29 16:19:04
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dyy丫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2009-10-29 15:01:
是不是试剂盒本身的问题

这个试剂盒是针对酵母/真菌的，一开始做的时候我是用丝状真菌试的，然后就想酵母一般都是作为模式生物，如果对酵母行得通，应该就不是试剂盒的问题；但是试后结果是一样的
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7楼2009-10-29 16:21:21
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dyy丫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by foreverru at 2009-10-29 11:32:
提取线粒体时要多多注意提取过程中的大环境和小环境，这一点很重要！！！也就是用来提取的药剂浓度要适当。

谢谢指点，就是不知道这个试剂盒的问题
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8楼2009-10-29 16:22:41
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ghost9106

铜虫 (初入文坛)
我用过丝状真菌的，量太少，没有提来。感觉效果还没有手提的好用。
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9楼2010-02-27 21:38:25
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