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dyy丫

银虫 (初入文坛)

[交流] 关于提取酵母、真菌等线粒体的问题,请假各位大侠

我正在做提取酵母线粒体的实验,用的是GENMED真菌/酵母细胞线粒体分离(高纯)试剂盒,十次,1500块钱,我已经试过好几次了,没有一次成功的,而且这个试剂盒操作步骤也很多,做一次大概要一个白天那样,还没有做出结果;观察线粒体使用詹纳斯绿(Janus Green B)染色法,在油镜下观察,但是这个试剂本底就有一定的影响......
     在此,我想请教一下,有没有那位大侠用过这个试剂盒——GENMED真菌/酵母细胞线粒体分离(高纯)试剂盒,来提取线粒体的,想请教一下经验,是不是我哪个步骤做错了,还是其他原因,先谢谢啦

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-28 at 13:00 ]
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zier1011

木虫 (著名写手)


dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢啦 10-28 12:30
没有用过,也没有提取过线粒体,不过帮你顶顶,希望有人帮你,祝好运
花还香香的
2楼2009-10-28 11:12:23
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foreverru

新虫 (小有名气)



dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢 10-29 16:21
提取线粒体时要多多注意提取过程中的大环境和小环境,这一点很重要!!!也就是用来提取的药剂浓度要适当。
3楼2009-10-29 11:32:38
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子


dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢啦 10-29 16:19
建议用超速离心的方法分离获得,试剂盒的回收率会很低,另外你的酵母样品里面的线粒体含量也很重要(测个酶活试试),还有试剂盒提取的时候对时间的把握会很重要,因为你要求是完整的线粒体。另外试剂盒的批次也有不稳定的情况,总之,不能舍不得花钱哦
可以用QQ找我……
4楼2009-10-29 12:11:58
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陈思容

铜虫 (正式写手)


dyy丫(金币+1,VIP+0):谢谢 10-29 16:23
是不是试剂盒本身的问题
5楼2009-10-29 15:01:51
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dyy丫

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-10-29 12:11:
建议用超速离心的方法分离获得,试剂盒的回收率会很低,另外你的酵母样品里面的线粒体含量也很重要(测个酶活试试),还有试剂盒提取的时候对时间的把握会很重要,因为你要求是完整的线粒体。另外试剂盒的批次也有 ...

我就是想测一下线粒体里面的一个酶酶活,只有提到线粒体之后,破碎线粒体再进行酶活测定,试剂盒里面最后一步就是超速离心的,前面的都是菌体预处理:细胞壁破除,细胞裂解等等。我就是想问问有没有做提取线粒体实验的,还有用过这个试剂盒的,想讨教一下经验的
6楼2009-10-29 16:19:04
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dyy丫

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2009-10-29 15:01:
是不是试剂盒本身的问题

这个试剂盒是针对酵母/真菌的,一开始做的时候我是用丝状真菌试的,然后就想酵母一般都是作为模式生物,如果对酵母行得通,应该就不是试剂盒的问题;但是试后结果是一样的
7楼2009-10-29 16:21:21
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dyy丫

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by foreverru at 2009-10-29 11:32:
提取线粒体时要多多注意提取过程中的大环境和小环境,这一点很重要!!!也就是用来提取的药剂浓度要适当。

谢谢指点,就是不知道这个试剂盒的问题
8楼2009-10-29 16:22:41
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ghost9106

铜虫 (初入文坛)

我用过丝状真菌的,量太少,没有提来。感觉效果还没有手提的好用。
9楼2010-02-27 21:38:25
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