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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 无缝克隆遇到的奇奇怪怪
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innocent.

新虫 (初入文坛)

[交流] 无缝克隆遇到的奇奇怪怪 已有1人参与

最近构建载体，想速度快一点就没用T4，直接用无缝克隆但一直失败（用的诺唯赞试剂盒），酶切后无缝连接转DH5a挑单菌落PCR，用目的片段引物P就有条带且条带长度正确，但用载体引物就一直p不出来，换了载体引物也不行，又提质粒酶切后发现长度与空载体长度一致，是不是说明没连上，那为什么拿目的片段引物能p出来呢？实在疑惑，已经重复做好几次了都是这样，三个基因都是这个问题，大家有出现过这样的情况吗？
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1楼 2024-10-14 10:07:24
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金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就是没连上呗，菌落pcr有假阳性，只能这么理解
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2楼2024-10-19 13:47:32
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