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wsdtxs

新虫 (初入文坛)

[求助] 加热纯化高温酶,加热处理后和处理前一点区别都没有 已有1人参与

在大肠杆菌中表达了一种热稳定蛋白,通过加热处理方法沉淀杂蛋白,同样的操作方法只有一次成功了,剩下每次都是和处理前一点变化都没有,有人知道这是怎么回事吗?已经提高了处理温度还是不行。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得,蛋白质被热变性后要不要在4度冰箱静置一段时间促进沉淀?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2024-10-05 23:14:57
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wsdtxs(fuyuandj86代发): 金币+10 2024-10-20 14:02:24
fuyuandj86: BioEPI+1 2024-10-20 14:02:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsdtxs at 2024-10-08 08:36:24
大肠杆菌表达的本底蛋白那么难被热沉淀吗...

是这样的,蛋白质变性之后不一定能马上沉淀,即使最终会沉淀,也可能需要个过程,或者不会全部沉淀,我对粗蛋白质样品进行酸变性、碱变性和硫酸铵沉淀处理的时候会在4度静置至少8个小时再离心,如果只静置2小时,那么离心完毕后第二天再离心也还是有沉淀的。所以你热变性之后会不会也在4度静置过夜再操作比较好。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2024-10-10 16:06:29
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