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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 加热纯化高温酶，加热处理后和处理前一点区别都没有
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wsdtxs

新虫 (初入文坛)

[求助] 加热纯化高温酶，加热处理后和处理前一点区别都没有 已有1人参与

在大肠杆菌中表达了一种热稳定蛋白，通过加热处理方法沉淀杂蛋白，同样的操作方法只有一次成功了，剩下每次都是和处理前一点变化都没有，有人知道这是怎么回事吗？已经提高了处理温度还是不行。
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1楼 2024-10-04 16:17:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wsdtxs(fuyuandj86代发): 金币+10 2024-10-20 14:02:24
fuyuandj86: BioEPI+1 2024-10-20 14:02:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsdtxs at 2024-10-08 08:36:24
大肠杆菌表达的本底蛋白那么难被热沉淀吗...

是这样的，蛋白质变性之后不一定能马上沉淀，即使最终会沉淀，也可能需要个过程，或者不会全部沉淀，我对粗蛋白质样品进行酸变性、碱变性和硫酸铵沉淀处理的时候会在4度静置至少8个小时再离心，如果只静置2小时，那么离心完毕后第二天再离心也还是有沉淀的。所以你热变性之后会不会也在4度静置过夜再操作比较好。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2024-10-10 16:06:29
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得，蛋白质被热变性后要不要在4度冰箱静置一段时间促进沉淀？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2024-10-05 23:14:57
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wsdtxs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2024-10-05 23:14:57
我觉得，蛋白质被热变性后要不要在4度冰箱静置一段时间促进沉淀？

大肠杆菌表达的本底蛋白那么难被热沉淀吗
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3楼2024-10-08 08:36:24
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mushroom22

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2024-10-09 20:50:11
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wsdtxs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2024-10-10 16:06:29
是这样的，蛋白质变性之后不一定能马上沉淀，即使最终会沉淀，也可能需要个过程，或者不会全部沉淀，我对粗蛋白质样品进行酸变性、碱变性和硫酸铵沉淀处理的时候会在4度静置至少8个小时再离心，如果只静置2小时，那 ...

感谢回复与帮助，请问你是做酶催化领域的实验吗，最近有一个实验一直没产物，可不可以加一个联系方式一起讨论一下，付费咨询的
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6楼2024-10-14 09:57:58
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