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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)

[求助] 类过氧化物酶相关计算已有1人参与

类过氧化物酶相关计算

最近刚刚接触类酶,有很多不懂的地方,跪求大佬指导帮助

制备了一个类酶材料,当反应体系组成为:
类酶(0.05 mg/mL, 15μL)+H2O2(1M,30μL)+TMB(0.225-1.8 mM,45μL)+HAc-Ac-(110 μL)
计算结果为:
Km=24 mM    Vmax=5.49×10-4;


相同的材料,当反应体系组成为:
类酶(0.05 mg/mL, 2μL)+H2O2(1M,4μL)+TMB(0.03-0.24 mM,6 μL)+HAc-Ac-(188 μL)
计算结果为:
Km=0.66 mM    Vmax=9.73×10-6。

不知道应该怎么选择材料浓度、过氧化氢浓度和TMB浓度范围,测试的数据图如下图所示,跪求大佬点拨

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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)

2楼2024-09-03 10:32:09
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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)

3楼2024-09-03 10:33:16
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空白色

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

理论上,材料浓度变化不会影响Km,不同的材料浓度能带来的只有Vmax变化且成正相关,而且还可以通过Kcat(Kcat=Vmax/【E】)当然实验时会因为各种各样的原因导致浓度变化时出现相差很大的Km。而且你这个属于CAT,双底物,应该有固定H2O2浓度,变化不同TMB浓度,还要有固定TMB浓度,变化不同的H2O2浓度。两种底物对应的不同Km与Vmax。具体如何选择测试体系这个一两句说不清楚

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2024-09-12 11:09:01
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空白色

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 空白色 at 2024-09-12 11:09:01
理论上,材料浓度变化不会影响Km,不同的材料浓度能带来的只有Vmax变化且成正相关,而且还可以通过Kcat(Kcat=Vmax/【E】)当然实验时会因为各种各样的原因导致浓度变化时出现相差很大的Km。而且你这个属于CAT,双底 ...

不好意思记错了,是POD
5楼2024-09-12 11:14:30
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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空白色 at 2024-09-12 11:09:01
理论上,材料浓度变化不会影响Km,不同的材料浓度能带来的只有Vmax变化且成正相关,而且还可以通过Kcat(Kcat=Vmax/【E】)当然实验时会因为各种各样的原因导致浓度变化时出现相差很大的Km。而且你这个属于CAT,双底 ...

谢谢大佬回复我们摸索试试,后续有问题再请教大佬

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6楼2024-10-10 17:32:15
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