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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 类过氧化物酶相关计算
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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)

[求助] 类过氧化物酶相关计算 已有1人参与

类过氧化物酶相关计算

最近刚刚接触类酶，有很多不懂的地方，跪求大佬指导帮助

制备了一个类酶材料，当反应体系组成为:
类酶(0.05 mg/mL, 15μL)+H2O2(1M,30μL)+TMB(0.225-1.8 mM,45μL)+HAc-Ac-(110 μL)
计算结果为：
Km=24 mM    Vmax=5.49×10-4；


相同的材料，当反应体系组成为：
类酶(0.05 mg/mL, 2μL)+H2O2(1M,4μL)+TMB(0.03-0.24 mM,6 μL)+HAc-Ac-(188 μL)
计算结果为：
Km=0.66 mM    Vmax=9.73×10-6。

不知道应该怎么选择材料浓度、过氧化氢浓度和TMB浓度范围，测试的数据图如下图所示，跪求大佬点拨

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1楼 2024-09-03 10:30:47
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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)
类过氧化物酶相关计算

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2楼2024-09-03 10:32:09
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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)
类过氧化物酶相关计算-1

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3楼2024-09-03 10:33:16
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空白色

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

理论上，材料浓度变化不会影响Km，不同的材料浓度能带来的只有Vmax变化且成正相关，而且还可以通过Kcat（Kcat=Vmax/【E】）当然实验时会因为各种各样的原因导致浓度变化时出现相差很大的Km。而且你这个属于CAT，双底物，应该有固定H2O2浓度，变化不同TMB浓度，还要有固定TMB浓度，变化不同的H2O2浓度。两种底物对应的不同Km与Vmax。具体如何选择测试体系这个一两句说不清楚
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天蓝蓝。
4楼2024-09-12 11:09:01
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空白色

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空白色 at 2024-09-12 11:09:01
理论上，材料浓度变化不会影响Km，不同的材料浓度能带来的只有Vmax变化且成正相关，而且还可以通过Kcat（Kcat=Vmax/【E】）当然实验时会因为各种各样的原因导致浓度变化时出现相差很大的Km。而且你这个属于CAT，双底 ...

不好意思记错了,是POD
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5楼2024-09-12 11:14:30
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天蓝蓝。

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空白色 at 2024-09-12 11:09:01
理论上，材料浓度变化不会影响Km，不同的材料浓度能带来的只有Vmax变化且成正相关，而且还可以通过Kcat（Kcat=Vmax/【E】）当然实验时会因为各种各样的原因导致浓度变化时出现相差很大的Km。而且你这个属于CAT，双底 ...

谢谢大佬回复我们摸索试试，后续有问题再请教大佬

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6楼2024-10-10 17:32:15
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