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smiles292

铁杆木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】关于免疫金标记时金与酶偶联条件的问题

在制作胶体金标记物的时候,为什么是用碳酸钾溶液调节金溶胶的pH值在蛋白等电点以上0.5个pH值,而不是用10毫摩的pH值为pI+0.5的缓冲液呢?
      我在的实验条件下有这样两种现象
1:用碳酸钾调节pH,在室温下进行金溶胶与蛋白的偶联,室温离心14000rpm,离心管壁上没有粘金
2:用10毫摩的磷酸pH值为pI+0.5的缓冲液分散金,在4度下进行偶联,4度下离心,在8000rpm下离心管壁上都有金的粘着
      求问究竟是调节pH手段的不同导致离心的差异还是偶联条件(包括由于调节pH的手段不同导致的离子强度的差异以及温度不同导致的偶联效率不同)的不同导致的呢?
     求问高手,这方面我实在不懂
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悲催莫过于让一个物化的去搞蛋白
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tracy007

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
smiles292(金币+1,VIP+0):我知道偶联效率一定会有差异,从我蛋白定量的数据上也可以说明,我就想知道为什么粘壁,同样感谢你的回复 10-29 11:21
smiles292(金币+2,VIP+0):能给我几篇这方面的文献么?谢谢!! 12-8 09:38
有一些非共价连接的是pH依赖性的,不同的pH条件造成连接效率的差异,楼主可以查阅一下这方面的文献,希望对你能有帮助
2楼2009-10-27 11:00:02
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珠zhenzhu

金虫 (小有名气)

★ ★
smiles292(金币+2,VIP+0):十分感谢 12-9 10:07
pH值会影响偶联的,有些蛋白与金的偶联可以在很宽范围内进行的
3楼2009-12-09 10:00:41
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tracy007

木虫 (正式写手)

楼主留个联系方式吧
4楼2009-12-11 15:59:15
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