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【求助】关于免疫金标记时金与酶偶联条件的问题
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在制作胶体金标记物的时候,为什么是用碳酸钾溶液调节金溶胶的pH值在蛋白等电点以上0.5个pH值,而不是用10毫摩的pH值为pI+0.5的缓冲液呢? 我在的实验条件下有这样两种现象 1:用碳酸钾调节pH,在室温下进行金溶胶与蛋白的偶联,室温离心14000rpm,离心管壁上没有粘金 2:用10毫摩的磷酸pH值为pI+0.5的缓冲液分散金,在4度下进行偶联,4度下离心,在8000rpm下离心管壁上都有金的粘着 求问究竟是调节pH手段的不同导致离心的差异还是偶联条件(包括由于调节pH的手段不同导致的离子强度的差异以及温度不同导致的偶联效率不同)的不同导致的呢? 求问高手,这方面我实在不懂 |
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