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新虫 (小有名气)

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[交流] 干货分享 | 试验动物的采血方法

一、大、小鼠割（剪）尾采血
当取血量较少时采用本法。采血前将鼠尾部浸在50℃左右温水中数分钟或用大功率灯泡照射数分钟，麻醉动物，使尾部血管充盈。用75%酒精擦拭鼠尾，用锋利的刀片在尾部作一横切口，割破尾静脉或动脉，让血液自由滴入盛器或用毛细吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。若多次取血，最好从鼠尾末端开始。小鼠每次可取血0.1ml左右，大鼠每次可取血0.3～0.5ml。若只需要几微升血量，可用锐器（刀或剪刀）垂直割去尾尖1-2 mm，用毛细吸管吸取血液。使用肝素处理过的毛细吸管，或将小鼠尾部放入肝素处理过的离心管内，可增加取血量。该方法可反复多次使用。安全可行的取血量和取血频率取决于鼠的总血量（50-70ml/kg），一般来说，每2-4周可取10%的循环血量，每24h可取1%的循环血量（参考《Manipulating the Mouse Embryo-A Laboratory manual 4th edition》P230）。
二、眼眶静脉丛（窦）取血
将动物麻醉后，取侧卧位放在一平面上，用食指和拇指压迫颈部两端使头部静脉血液回流困难，眼球突出。通常用硬质毛细玻璃管或巴斯德玻璃吸管，与鼠面部呈45°夹角，由眼内角刺入眼睑和眼球之间，向眼底部方向移动，稍加旋转以切开静脉丛。一般刺入深度为小鼠约2～3mm、大鼠约4～5mm，刺入出血后，将取血管边推边抽。取到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时将采血器拔出。为防止术后穿刺孔出血，用消毒纱布压迫眼球30秒。若手法得当，体重20～30g的小鼠每次可采血0.2～0.3ml，体重200～300g的大鼠每次可采血0.4～0.6ml。
三、摘眼球取血法
本法多用于小鼠，所采血液为眶动脉和眶静脉的混合血，一般可采集小鼠体重4%～5%的血量。操作前应深度麻醉小鼠，将小鼠侧卧位置于平面上，用食指和拇指压迫眼周皮肤，是眼球突出充血，用眼科镊迅速夹去眼球，并将鼠倒置，头向下，可适当从身体后侧向眼部按摩小鼠躯体，使眼眶内血液流入事先准备好的收集管。此法只能一次采血，如需反复多次采血样时，则不能采用这种方法。
四、大（小）鼠心脏采血
大（小）鼠麻醉后，仰卧位固定，剪去胸前区被毛，皮肤消毒后，用左手食指在左侧第3-4肋间触摸到心搏处，右手持带有4-5号针头的注射器，选择心搏最强处垂直向下穿刺，当刺中心脏时，血液会自动进入注射器。每次采血量0.5-0.6mL。除此之外，也可侧卧位穿刺或仰卧位沿胸骨水平纵向进针。心脏采血注意要点：①要迅速而直接插入心脏，否则，心脏将从针尖移开；②如第一次没刺准，将枕头抽出重刺，不要在心脏周围乱探，以免损伤心、肺；③要缓慢而稳定地抽吸，否则太多的真空反而使心脏塌陷。若血流阻断，可轻轻旋转针头或稍微抽出针头。若不需保留动物存活时，也可麻醉后切开动物胸部，将注射器直接刺入心脏抽吸血液。操作时，先将动物深度麻醉，然后将其固定在鼠板上，剖开胸腔，然后将注射器针头刺入右心室后立即抽血。开胸时，要尽可能减少出血。
五、大血管采血
大、小鼠可从股动（静）脉、腋下动（静）脉、颈动（静）脉或腹主动脉采血。在这些部位采血需麻醉后固定动物，然后做动（静）脉分离手术，使其暴露清楚后，用注射器沿大血管平行方向刺入，抽取所需血量。
六、兔耳缘静脉采血
多用于家兔等动物的中量采血，可反复采取。操作时，将兔固定于兔盒内或由助手固定，选静脉较粗、清晰的耳朵，拔去采血部位的被毛，消毒。为使血管扩张，可用手指轻弹或用二甲苯涂擦血管局部（进行血细胞计数则不宜用二甲苯）。用6号针头沿耳缘静脉远心端刺入血管。若所需血液较少，可用锋利刀片在血管上作一切口或用针头刺破血管即可。取血后，用棉球压迫止血。兔用此法一次可采血5～10ml。
七、兔耳中央动脉采血
固定兔后，一手固定兔耳，一手持注射器，在中央动脉末端，沿动脉平行的方向刺入动脉，刺入方向应朝向近心端。一般用6号针头采血。取血完毕后注意止血。此法一次可取血10～15ml。注意：兔的习性胆小易惊，其外周血液循环对外界环境刺激极为敏感，耳中央动脉易发生痉挛性收缩。因此，抽血前必须让兔耳充血，并赶在动脉扩张，而未发生痉挛性收缩前立即抽血。若注射针刺入后尚未抽血，血管已发生痉挛性收缩，应将针头放在血管内固定不动，待痉挛消失血管舒张后再抽。若在血管痉挛时强行抽吸，会导致管壁变形，针头易刺破管壁形成血肿。
八、兔心脏采血
将兔麻醉后，仰卧固定。在左侧胸部心脏部位去毛，消毒。用左手触摸左侧第3～4肋间，选择心搏处穿刺（胸骨左缘外3mm处），进针后针头偏向胸骨，与水平面呈45°夹角，或沿剑突尾端缘和腹面平面呈30°角向头端刺入。抽出所需血量后，应迅速拔针，用手指紧压术部并消毒。一次取血不超过20～25ml。注意：采血动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固或溶血，采血一般可选择8号针头，采血中回血不好或动物躁动时应拔出注射器，重新确认后再次穿刺采血。一般经6～7天，可重复进行心脏采血。
九、背跖静脉采血

背跖静脉采血主要用于豚鼠。背跖静脉有两根：外侧跖静脉和内侧跖静脉，均可用于采血。操作时，由助手固定动物，并将其后肢膝关节伸直到操作者面前，操作者将动物脚面用酒精消毒，并找出外侧或内侧跖静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿注射器刺入静脉采血。拔针后立即出血，并可见刺入部位呈半球隆起，应用纱布或脱脂棉压迫止血。反复取血时，两后肢交替使用。
十、犬前、后肢皮下浅层静脉采血

此法在犬使用最广泛。前后肢皮下千层静脉主要包括：前肢内侧皮下头静脉、后肢外侧小隐静脉。将动物侧卧固定，减去采血部位的被毛，用碘酒、酒精消毒皮肤，用胶皮带扎紧或用手抓紧静脉近心端，使血管扩张，使用6号或7号针头的注射器从静脉远心端水平刺入血管，抽取时速度要稍慢，以防抽瘪血管。当针头插入血管后，应解除静脉上端加压的手或胶皮管。取血完毕后，应注意止血。如只需较少血量，可直接用针尖穿刺，再用玻片接住或用滴管吸取。
十一、犬颈静脉采血

从外周静脉小的犬采大量血时最好选择颈静脉。通常一人固定犬，另一人采集血样。将动物侧卧固定，使颈伸直并稍向一侧歪。减去颈部被毛，消毒。对颈基部施加压力可阻止静脉回流，即可看见血管。用连有7号针头的注射器，针头平行血管向头部刺入血管。由于此静脉在皮下易于滑动，针刺时除用左手固定好血管外，刺入要准确。取血后注意压迫止血。本法一次可采集较多血。
十二、犬心脏采血

将动物麻醉后，仰卧固定，前肢向背侧方向固定，暴露胸部，剪去左侧第3~5肋间的被毛，消毒。用左手探摸，确定搏动最强处。右手持连有7号针头的注射器。一般选择胸骨左外缘1cm处，于第3~4肋间穿刺。穿刺时，可随针头接触到心脏跳动的感觉，调整刺入方向和深度，但不能让针头在胸腔内乱晃。当穿刺正确时，血液自动流入注射器。本法可抽取大量血液。
十三、猪耳大静脉

当需中量或少量血时采用。将动物固定后，用酒精、碘酒消毒。用力擦拭猪耳，可清晰见到耳缘静脉，用连有6号针头的注射器直接抽取。注意抽吸速度不要太快，因猪耳皮肤较厚，应选择锐利的针头。另外，可用刀片切开静脉，用滴管等物吸取。取血后注意压迫止血。
十四、猪心脏采血

基本方法同啮齿类动物的心脏采血。因猪的胸部肌肉较厚，应使用心脏穿刺针。仰卧固定，剃毛，消毒。左手探摸，在左3～4肋间处，右手持连有心脏穿刺针的注射器。如第一次没有成功，则拔出后重新穿刺。完毕后压迫止血。本法可采集大量血液。

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