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补料发酵方面的问题已有5人参与
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各位大佬，资料上都说分批补料可提高产物浓度。关于产物抑制还有一些底物浓度过高的阻碍作用我也了解一些。 不过我想知道的是： 1.在补料的同时，可以给微生物提供更好的环境，产量提高没什么问题，但是发酵液的体积也会增加啊，发酵液中产物的浓度会升高吗？如果补料培养基和发酵培养基成分一样的话，那这和一开始就提高发酵培养基的体积是不是没有什么区别？比如发酵液一开始是5L，通过补料补到10L，和一开始就接种到10L的发酵液中有很大的区别吗？ 2.如果补一些易溶解成分比如单糖，那对培养基体积的影响不大，但是工业发酵上的成分可能溶解度并不很好，那就需要很多的水才能溶解，那采用液体补料的方式补这些成分对培养基的体积影响不是很大吗？还是说可以直接使用固体进行补料？ 关于第一个问题，我的想法是，一开始的基地培养基是为了快速获得大量的的菌体，而产物的发酵则是适合在一个营养成分比较低的条件下进行，补料的目的是为了维持这个较低营养成分的条件。但是我仍然不明白那些难溶性成分比如淀粉之类的是怎么进行补料的？ 纯学生，没有了解过真正的生产实际情况，可能有些想当然，还望各位大佬赐教，有具体例子的话最好。 |
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【答案】应助回帖
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单位OD表达量。和湿重表达量，单位体积表达量等等都一样，都是需要将样品重悬到一定体积，然后去检测重悬后样品中目标蛋白浓度， 都可以换算出整个发酵体积的目标表达总量。 但是，单位OD表达量，无论哪个发酵时期，样品量都是恒定都OD值。排除了菌体增长过程菌体量增加对 表达产率都影响。比如发酵终点OD是100. 发酵过程OD为1、5、10、50、100的时候都取样。 如果固定取100OD样品，这几个点取样体积就是100ml，20ml、10ml、2ml和1ml，统一离心并重悬到5ml，就制备成浓度20OD的样品。 如果以体积为单位，每个点取样2ml，这五个点样品OD就是2、10、20、100、200，统一离心并重悬到5ml，得到OD浓度就是0.4、2、4、20、40.这几个样品之间蛋白量差异并不是表达产率都差异，还包括菌量的差异早晨的产量差异。 不能真正反应菌都表达效率。 第二个问题您考虑的是。但是单因素还是多因素是可以转换的。但是单一原料无论成分是否复杂，是可以只当一个因素考虑的。因为你也无法改变这原料都成分。如果您能改变里面的成分配比，您就可以当多因素来做。 其实这些细节就是发酵的优化点，发酵优化过程主要是摸索菌体生长和蛋白表达的平衡关系。 菌长快了表达率低，菌体少了表达量少，既要菌体长，又要表达率不低，菌体量也要稳步增加。 前期生长过程比生长速率可以快点，进入表达阶段，可以通过调节pH、DO、温度和补料，降低比生长速率。让菌稳步生长，也稳步表达。 上游我原核还是做过一些实验。下游蛋白纯化做的更多一点。 你是学校还是企业，下游纯化也要做吗？ |
11楼2024-08-13 22:10:31
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wjny: 金币+2, ★有帮助, 感谢回答，算是做发酵抗生素之类的吧 2024-07-23 11:02:54
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wjny: 金币+2, ★有帮助, 感谢回答，算是做发酵抗生素之类的吧 2024-07-23 11:02:54
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第一，微生物生长好的环境， 一定是合适的条件才行，pH、盐、碳源氮源浓度和比例。温度、搅拌速度、罐压等等，要研究的因素多了。 这也是为什么有发酵的基础培养基浓度碳源比较低的原因。太高生长不好呗。 第二，多看几篇补料发酵的文章就会发现，基础培养基的浓度低，补料培养基的浓度高很多。 你就明白为什么补料了。补料的种类，碳氮比，流加速度等等，影响的是菌体生长和目标产物表达。 比如长的快，不表达表达少。 发酵很难的，  没做过还是多看几篇文章。自己做的时候才会少犯错。你做什么发酵研究的？后续提纯更难。 |
2楼2024-07-22 18:27:02
后来就算
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wjny: 金币+5, ★★★很有帮助, 感谢回答，很有帮助 2024-07-23 11:14:41
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wjny: 金币+5, ★★★很有帮助, 感谢回答，很有帮助 2024-07-23 11:14:41
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1、发酵的体积会随着风吹而减少的，最关键的是发酵的营养物质会随着菌体生长而消耗，且相比于摇瓶的高密度发酵在指数期后期，主消耗物很快就没有了，所以补料是必需的。至于是补全料（与基础料的配方一样）还是只补主反应物，是根据菌种代谢需要来的。一般补主反应物的较多，因为一般情况下补全料会影响发酵产物的产生。 2、补主反应物的话，浓度越高会越好一些，只要是实际机械、流动性、活化、灭菌等工艺考量后的比较合适的浓度，因为确实会带入水分，稀释发酵液，增长发酵体积。比如70-80%的糖液。 3、至于为什么很少见直接使用固体进行补料，至少有灭菌与无菌操作方面的考虑。固体灭菌需要干热的，温度较高，如果是糖的话就变质了，如果不灭菌会带入大量的杂菌。再有豆粕之类的，如果不活化、灭菌，还有带入抑制生长的物质。 4、淀粉之类一般配置成高浓度的淀粉溶液，再利用淀粉酶、糖化酶降解，经过消毒后，当糖化液补加。 |
3楼2024-07-23 08:11:12
4楼2024-07-23 11:34:15