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Neil-W铁虫 (初入文坛)
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[求助]
外周血提PBMC形态 已有1人参与
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| 跟课题组大方向做的不同，所以没人能指导，想看一下实拍的PMBC的状态。刚提的也不知道对不对。希望各位大佬指导，感恩！ |
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nono2009: 屏蔽内容, 违规存档, 违规信息 2024-07-14 19:41:29
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本帖内容被屏蔽 |
3楼2024-07-14 15:09:03
czyzsu
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【答案】应助回帖
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如何通过显微镜观察区分外周血单个核细胞中的不同类型细胞？ 为了确认您提取的外周血单个核细胞（PBMC）的状态是否正确，您可以通过显微镜观察细胞的形态来进行初步判断。PBMC通常包括淋巴细胞和单核细胞，这些细胞具有相对较大的圆形或椭圆形核，并且细胞的大小和形状应该是一致的。在正常情况下，PBMC的形态应该是规则的，没有明显的破损或聚集现象。 https://picture-search.tiangong. ... 01d2b840fa4b656.jpg 由于您提到想看到实拍的PBMC状态，但搜索结果中没有直接提供图片或视频资源，您可以参考相关的实验指南和描述来预期PBMC的外观。例如，在Bilibili上有关于PBMC分离提取的视频教程，您可以参考这些视频中的实拍内容来对比您自己提取的细胞状态。此外，知乎上也有关于Ficoll法提取PBMC的详细步骤，这些步骤可以帮助您检查提取过程是否符合标准操作。 如果您对自己提取的PBMC的状态感到不确定，建议您使用显微镜进行观察，并与专业的实验指南或教学视频中的描述进行比对。如果有必要，您也可以咨询经验丰富的同事或专家以获得进一步的指导。在实际操作中，确保使用无菌的工具和试剂，以及在适宜的条件下进行操作，以保证细胞的活性和纯度。 观察步骤和区分技巧 通过显微镜观察外周血单个核细胞（PBMCs）中的不同类型细胞，通常涉及以下步骤： 样本制备：首先，需要制备外周血的涂片，并进行染色处理，常用的染色方法包括瑞氏染色或吉姆萨染色，这些染色方法可以突出细胞的形态和核结构。 细胞观察：在显微镜下，首先使用低倍镜头找到细胞分布较为密集的区域，然后切换到高倍镜头仔细观察单个细胞的形态特征。 细胞区分： 淋巴细胞：通常具有相对较小的细胞体积和圆形或稍微凹陷的核，核染色质紧密排列，呈现出所谓的“鸡心”或“马蹄”形状。 单核细胞：体积较大，核不规则，可能表现为扭曲或折叠，核染色质相对松散，呈现网状结构。 嗜碱性粒细胞：虽然它们属于多形核细胞，但在某些情况下可能与单个核细胞一起被分离，它们具有较大的细胞体积和多叶核。 染色特征：不同类型的细胞在特定的染色剂下会展现不同的颜色和亮度，这些特征有助于进一步区分细胞类型。 形态学特征：除了核的形状和染色质的分布，细胞的大小、形态和细胞质的特征也是区分细胞类型的重要依据。 免疫学鉴定：在某些实验中，可能会使用流式细胞术结合特定的抗体进行免疫学鉴定，以更准确地区分细胞类型。 通过上述步骤，结合对细胞形态学和染色特征的观察，可以在显微镜下有效区分外周血单个核细胞中的不同类型细胞。在实际操作中，应注意细胞的保存状态和染色质量，以确保观察结果的准确性。 外周血单个核细胞提取后需要注意哪些保存条件以保持其活力？ 外周血单个核细胞（PBMC）的提取后，为了保持其活力，需要特别注意以下几个保存条件： 温度控制：提取后的PBMC应在4°C条件下保存，以减缓细胞代谢速率并减少细胞损伤。如果计划长期保存，应使用程序降温法逐渐冷却至-70至-90℃，然后转移至液氮中冷冻保存。 冻存液的选择：使用含有适当冷冻保护剂的冻存液，如二甲基亚砜（DMSO），可以迅速渗透入细胞，增加细胞膜对水的通透性，减少冰晶形成，保护细胞膜和细胞器免受损伤。此外，添加其他成分如人血清白蛋白、蔗糖等可以降低DMSO浓度，减少对冻存细胞的伤害。 细胞密度：适宜的细胞密度有助于维持细胞活力。研究表明，细胞保存密度为(1-2)×10^6/ml时细胞数量下降趋势减缓。 抗凝剂的使用：血液样本在采集后需要立即加入合适的抗凝剂，如EDTA或肝素，以防止血液凝固，维持细胞的完整性。 快速处理：在样本采集后，应尽快进行单细胞分离和测序处理，以最大限度地保持细胞的活性和完整性。 避免污染：在取样和处理样本的过程中，应该使用无菌技术，避免任何细菌或病毒污染样本。 运输条件：在取样和运输过程中，应该保持样本的低温，以防止细胞失活。一般建议在4°C以下保存样本，并在24小时内处理。 遵循这些条件可以有效地保持外周血单个核细胞的活力和功能，为后续的科学研究或临床应用提供高质量的细胞材料。 Ficoll法提取PBMC时应避免哪些常见的操作错误？ 避免的操作错误 在使用Ficoll法提取外周血单个核细胞（PBMC）时，应特别注意以下几点以避免常见的操作错误： 混合问题：在将稀释的血液加入Ficoll上层时，必须轻柔操作，避免两种溶液混合在一起。应该让血液轻轻地覆盖在Ficoll上方，形成清晰的分界。 离心速度和时间：离心时应设置为2,000 rpm，持续20分钟，并且降速设置应为no break或只有1-2成的制动，以确保细胞层不会被破坏。 分层液的处理：离心后，应小心吸取包含PBMC的白色细胞层，避免扰动下层的红细胞和上层的血浆。 洗涤步骤：在收集PBMC后，应使用PBS或适宜的缓冲液进行洗涤，以去除剩余的Ficoll和其他杂质。洗涤时应注意彻底去除上清液，以免细胞损失。 细胞重悬：洗涤后，应使用适量的培养基或适宜的细胞重悬液轻轻重悬PBMC，以保持细胞活性。 避免污染：整个操作过程应在无菌条件下进行，以避免微生物污染。 温度控制：某些步骤可能需要在特定温度下进行，以保持细胞的完整性和活性。 设备检查：确保使用的离心机和其他设备运行正常，以避免因设备故障导致的操作错误。 遵循上述注意事项可以提高PBMC提取的效率和细胞的质量，减少实验误差。 |
2楼2024-07-14 11:37:49
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