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wangxy229

新虫 (初入文坛)

[求助] GST标签蛋白纯化 已有1人参与

想问一下各位大佬,我的目的蛋白大约88kDa,加上GST标签一百稍多一些,采用原核表达纯化。质粒构建过程没问题,就是纯化的时候GST位置很深,目的蛋白的位置很浅 几乎没有,尝试改变了很多条件,但还是这样 还有别的办法嘛

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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个问题很常见。

GST标签和你的蛋白中间的连接子,容易被酶解。导致纯化出大量的标签。

解决办法:1. 可以尝试添加蛋白酶抑制剂,尝试低温冰上操作。2. 经济的方法是,多查阅文献,看看别人有没有做过该蛋白,参考使用的表
达系统和纯化方法。3. 重组蛋白表达纯化遇到失败很正常,请理清思路,思考表达纯化该蛋白的目的,从多方面了解该蛋白的性质,再考虑表达和纯化的方式。
2楼2024-07-24 09:10:51
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


purimag的琼脂糖GSH磁珠好用

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3楼2025-01-24 15:18:20
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