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wangxy229

新虫 (初入文坛)

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[求助] GST标签蛋白纯化已有1人参与

想问一下各位大佬，我的目的蛋白大约88kDa，加上GST标签一百稍多一些，采用原核表达纯化。质粒构建过程没问题，就是纯化的时候GST位置很深，目的蛋白的位置很浅几乎没有，尝试改变了很多条件，但还是这样还有别的办法嘛

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1楼 2024-07-06 20:37:06

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heylixing

铁虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

这个问题很常见。

GST标签和你的蛋白中间的连接子，容易被酶解。导致纯化出大量的标签。

解决办法：1. 可以尝试添加蛋白酶抑制剂，尝试低温冰上操作。2. 经济的方法是，多查阅文献，看看别人有没有做过该蛋白，参考使用的表
达系统和纯化方法。3. 重组蛋白表达纯化遇到失败很正常，请理清思路，思考表达纯化该蛋白的目的，从多方面了解该蛋白的性质，再考虑表达和纯化的方式。