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汕头大学海洋科学接受调剂
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] SDS_PAGE跑胶无条带

最近跑蛋白电泳总是不顺利,开始的时候样品加不进去总是飘,
好不容易加进去了,跑了半天居然除了marker都没有条带。明明看到溴酚蓝移动呢。
而且是破碎的菌体蛋白,肯定应该有条带啊!
唉 恳请各位虫友前辈帮忙给分析分析,如何解决!
谢谢各位了!

[ Last edited by 1949stone on 2009-10-24 at 11:06 ]
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

loading buffer是以前配的一直放-20度冰箱
用前再加的巯基乙醇,是不是时间太长了?
菌体再怎么稀释也应该有蛋白阿!
7楼2009-10-25 20:41:02
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黑罕

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):不错 不错 10-24 11:05
首先到隔壁组去跑样
看是否是样品的处理的问题
然后就要考虑试剂的问题
一个个的排除找问题
2楼2009-10-24 11:04:44
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missu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 10-24 15:16
你的样品是怎么处理的啊?配制的Loading Buffer确定没有问题吗?样品和Loading Buffer要充分混匀,一般不会加不进去或是飘出来的。另一方面,你说除Marker以外都没有条带,那么你有没有在上样前定过总蛋白的浓度呢?毕竟SDS-PAGE的检测范围是有限的。如果你破碎菌体时使用的Buffer太多这样会造成蛋白质的稀释,自然就跑不出条带了。原因有很多种,还是要自己逐一分析了。
3楼2009-10-24 13:00:04
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是loading buffer出问题了?
4楼2009-10-24 16:58:17
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