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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS_PAGE跑胶无条带
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] SDS_PAGE跑胶无条带

最近跑蛋白电泳总是不顺利，开始的时候样品加不进去总是飘，
好不容易加进去了，跑了半天居然除了marker都没有条带。明明看到溴酚蓝移动呢。
而且是破碎的菌体蛋白，肯定应该有条带啊！
唉 恳请各位虫友前辈帮忙给分析分析，如何解决！
谢谢各位了！

[ Last edited by 1949stone on 2009-10-24 at 11:06 ]
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1楼 2009-10-24 10:36:57
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黑罕

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0):不错 不错 10-24 11:05
首先到隔壁组去跑样
看是否是样品的处理的问题
然后就要考虑试剂的问题
一个个的排除找问题
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2楼2009-10-24 11:04:44
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missu

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-24 15:16
你的样品是怎么处理的啊？配制的Loading Buffer确定没有问题吗？样品和Loading Buffer要充分混匀，一般不会加不进去或是飘出来的。另一方面，你说除Marker以外都没有条带，那么你有没有在上样前定过总蛋白的浓度呢？毕竟SDS-PAGE的检测范围是有限的。如果你破碎菌体时使用的Buffer太多这样会造成蛋白质的稀释，自然就跑不出条带了。原因有很多种，还是要自己逐一分析了。
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3楼2009-10-24 13:00:04
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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是不是loading buffer出问题了？
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4楼2009-10-24 16:58:17
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star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖
★
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我以前遇过类似的情况，我的原因是因为loading bufer和上样缓冲液是自己配的，调的pH不准就会引起样品往上飘
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5楼2009-10-24 19:57:38
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food8291

铜虫 (小有名气)
★
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Loading Buffer中甘油含量不足，比重不够所以飘样。ph值应该不会影响漂样
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6楼2009-10-25 17:06:11
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
loading buffer是以前配的一直放-20度冰箱
用前再加的巯基乙醇，是不是时间太长了？
菌体再怎么稀释也应该有蛋白阿！
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7楼2009-10-25 20:41:02
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nn0808

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
样品往上飘了,问题应该出在这里吧,同意6楼的分析.
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8楼2009-10-25 22:10:35
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tomimi

银虫 (初入文坛)
★
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我也是跑菌体破碎的蛋白，之前用考马斯亮蓝是有蛋白的，但是跑电泳也是跑不出来
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想要专心科研了。
9楼2009-12-12 23:13:33
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