| 查看: 408 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
AFLP选择性扩增条带弥散
|
|||
|
最近做的AFLP选择性扩增条带弥散成一片 大概在300-800之间 根本看不出比较亮的一条一条的带 用的是1%的琼脂糖胶 请问弥散的原因是什么？ 酶切、连接体系 10×Buffer 5ul 接头 各1ul（5mM） Primers 各0.2ul（100ng/ul） 模板 1.2ul T4连接酶 5U 10mMATP 5ul EcoR I 5U MspI/HpaII 5U 加ddH2O 至50ul 预扩体系 10×Buffer 2ul dNTP 0.4ul Primers 各0.2ul（100ng/ul） 模板 1.2ul rTap酶 0.2ul 加ddH2O 至20ul 另外PCR条件是这样的 1.94℃变性 30s 2.60℃（59）退火 40s 3.72℃延伸 1 min 4.72℃延伸 10 min Step1 to step3循环37次 6.4℃ for ever 选扩体系是这样的(预扩增产物直接使用 未稀释) 10×Buffer 2ul dNTP 0.4ul Primers 各0.5ul（100ng/ul） 模板 3ul rTap酶 0.2ul 加ddH2O 至20ul 另外PCR条件是这样的 1.95℃预变性 3min 2.94℃变性 30s 3.65℃退火 30s 4.72℃延伸 1min 5.step2 to 4 12个循环 6.94℃变性 30s 7.56℃退火 30s 8.72℃延伸 1min Step6 to 8循环23次 9.72℃延伸 10 min 6.4℃ for ever [ Last edited by amisking on 2009-10-23 at 12:56 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
三甲基碘化亚砜的氧化反应
已经有4人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有5人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有12人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
-
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？
已经有3人回复
-
论文投稿，期刊推荐
已经有4人回复
-
硕士和导师闹得不愉快
已经有13人回复
mhb828
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 7580.4
- 散金: 20
- 红花: 3
- 帖子: 1357
- 在线: 196小时
- 虫号: 314735
- 注册: 2007-02-25
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
2楼2009-10-23 12:14:26
3楼2009-10-25 14:04:14
4楼2009-10-25 14:12:06