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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 食品添加剂 » 【求助】盐酸克伦特罗抗原合成失败
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eaglehu

[交流] 【求助】盐酸克伦特罗抗原合成失败

参考了不少文献，我合成盐酸克伦特罗抗原过程如下：
3mg盐酸克伦特罗标准品溶解到1ml 1M HCl 和0.5ml水，4摄氏度下分三次加0.06ml NaNO2，并遮光搅拌1小时，然后加入氨基磺酸氨终止。
将上述溶液缓慢滴加到1ml的OVA溶液中（含OVA 20mg），4摄氏度搅拌的同时调节pH在9左右，搅拌1h，然后冰箱过夜。
再就是用PBS透析了。
最后用这个作为包被原进行ELISA，完全没有显色反应。

抗体确定无误，酶标抗体与底物显色反应良好。
标准品也没有问题。

请教一下，是不是不能直接用标准品制备抗原？还是我的实验过程有问题呢？
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1楼 2009-10-22 13:52:42
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meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心，不没于物
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
hawkyin(金币+2,VIP+0):谢谢回帖，欢迎常来食品版！~ 10-22 22:54
OVA隔夜我估计没问题。盐酸克伦特罗作为半抗原加入HCl 和NaNO2中是为了重氮化，这个反应你确定应该在低温下进行反应吗？一般只反应一个小时应该是常温吧？
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《memory》---BarbaraStreisand
2楼2009-10-22 17:34:37
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eaglehu

谢谢你的回复，我也是参照某些文献写的低温遮光搅拌重氮化进行的，我试一下常温1h看看。
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3楼2009-10-23 10:26:00
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