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easyrider

金虫 (小有名气)

[交流] 有关培养基的问题

基于本人是新手,至少是实验上的新手,遇到一个很头疼的问题,在这里希望能得到高人的指导
      本人需要配置培养毛霉用的马铃薯培养基,使用新鲜马铃薯+葡萄糖+琼脂,115℃高温灭菌20分钟,前面工作完全按照常规配制方法进行,然而,灭菌后放入培养箱内30摄氏度(28-37度均用过)检测灭菌情况,发现总是会长出一层米黄色的菌,浅浅的覆盖于培养基表面,有些还分布于基内(点状),即培养基中间和表面都有,十几天做了8次了,依旧染菌,开始觉得是灭菌不彻底,改到30分钟后入培养箱检测灭菌情况,依旧长出这些东西,我只觉得应该是种兼性厌氧菌,但不知道来源,后来我试着用121℃灭菌30分钟,目前(两天内)好象没有长出菌,但考虑到培养基含葡萄糖,121度下其损失量增大,可能会影响接种菌的生长,现在不知道用什么对策好了,这该死的菌啊 !大侠们帮忙分析下吧!

PS1:我配置的有铺了斜面的试管及锥瓶,均染菌了,最近一次放在超净工作台上的没有放入培养箱的却没发现这种菌,我觉得可能是室温不适合它的生长吧!
PS2:染菌参考类型:
      115℃灭菌20分钟  操作台(室温)+培养箱(30-37)  均染菌;
      121℃灭菌20分钟  操作台(室温)+培养箱(30-37)  均染菌;
      115℃灭菌30分钟  操作台(室温)---未染;培养箱(30-37)---染菌;
      121℃灭菌30分钟  操作台(室温)+培养箱(30-37)均未染菌。
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easyrider

金虫 (小有名气)

我现在就是不能确定是什么菌,照了些照片,但是不知道怎么发上来
3楼2009-10-21 00:14:17
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easyrider

金虫 (小有名气)

是切成小块的,我去试试磨粉试试吧,死马当活马医了,现在什么方法都要去试试
5楼2009-10-21 00:17:48
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-10-21 09:37:
浅浅的覆盖于培养基表面,有些还分布于基内(点状)

有没有可能不是菌啊  会不会是培养基冷热处理后产生的“纹路”什么的啊

如果是纹路,那121灭的就有没有产生的,所以有些说不通丫
13楼2009-10-21 13:34:54
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 含笑天天 at 2009-10-21 12:15:
1、首先可以肯定的是你培养基灭菌不彻底,但也不能在121度灭菌,这样的话不仅葡萄糖损失,而且产生有毒物质,会抑制菌体的生长,研究就没价值了;土豆培养基配置时,都要先在微波炉里或者电磁炉上加热搅拌,使其在 ...

我现在也有这个考虑,准备用别的实验室的锅同样条件下灭灭看,如果115没出现菌那就确实是锅的问题了,要是仍然有,我只能121灭了,高温长时间下还是可以灭掉的,只是确实葡萄糖损失了
14楼2009-10-21 13:38:07
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2009-10-21 11:49:
用121灭菌,如果你怕损失葡萄糖的话,就葡萄糖过滤灭菌,待培养基灭菌后加入

这个过滤灭菌是怎样操作的丫?但灭菌后在加入,不是操作中又增加了染菌的可能性了么?我没什么信心,都做了这么多次了,打击很大滴丫!
15楼2009-10-21 13:41:20
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金虫 (小有名气)

真是多谢啦,很详尽
17楼2009-10-21 15:01:10
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by njxmhl at 2009-10-22 00:23:
我去年做PDA时也经常染菌,期间换了N个人做,换了N个高压灭菌锅。最好的结果是一半染菌一半未染菌。后来听说当年的马铃薯得了一种不知什么名的病,最后解决问题的方法你也许是想不到,那就是不要总买一家的,要多 ...

不会吧……我已经换了葡糖和琼脂,确保万无一失了,连土豆也要换么?(⊙o⊙)
24楼2009-10-23 09:47:14
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by star1987 at 2009-10-23 19:17:
我觉得可能有两个方面的原因:
1.可能是马铃薯上有某中菌,在其内部,不容易被杀死
2.培养箱中有没有其他人培养的菌,如果有的话,就是别人的菌把你的培养基污染了,因为你放在超净工作台上的没染菌

培养箱里没有任何其他菌种,是新的,我还用甲醛熏蒸过,这点排除了,马铃薯的问题确实有点让人介意,之前不是没想过,但还以为是我想得太多,看来确实也有可能哦!
26楼2009-10-23 23:25:30
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easyrider

金虫 (小有名气)

最新情况

感谢大家提出的建设性意见,都很宝贵哦!告诉大家一个比较欣慰的消息,昨天新做的一组培养基,采用了间歇式灭菌(也是一个前辈建议的),到现在为止培养基已经在培养箱内安全度过28小时了,没有出现染菌情况,我觉得这是不错的方法,也和大家分享下,希望以后遇到和我一样问题的人,可以把这个方法做一定参考吧。
针对我的实验,即115℃灭菌20分钟,停10分钟,再来一次
27楼2009-10-23 23:32:23
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