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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 做药代用HPLC测血药浓度时配制对照品溶液时遇到的问题。
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xiongzai08

金虫 (小有名气)

[交流] 做药代用HPLC测血药浓度时配制对照品溶液时遇到的问题。

我做药代用HPLC测定血药浓度时，配制对照品是先用甲醇溶解标准品配成一定浓度的母液备用，做标准曲线时精密吸取一定量的母液加入血浆中配制不同浓度的对照品溶液，这时候加的血浆是直接加入抗凝剂后离心所得的血浆吗？如果是这样的话，加入母液是会不会使血浆中的蛋白质变性产生沉淀？即使没沉淀，这样的对照品进样时会不会产生很多蛋白质类的杂峰？请指教！
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1楼 2009-10-20 21:54:36
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Methadon

★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 11-2 13:50
可以先加标准品，挥干后，再加血浆，这样甲醇就不会使血浆里的蛋白沉淀了。如果你加的量少，10ul左右的话，即使有点沉淀也没关系的。只要杂质对样品没干扰就可以了
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10楼2009-11-02 13:00:27
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皇阿玛

铁杆木虫 (著名写手)
你这样做：对照品进样时会产生很多蛋白质类的杂峰是必然的。前提要看空白血浆对样品的测定是否有干扰，没有可以这样做。要是有的话，需要对血浆样品作进一步的处理。
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2楼2009-10-20 23:50:44
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shine_chen

金虫 (初入文坛)
★ ★
472514568(金币+1,VIP+0):奖励积极回帖交流！ 10-21 17:19
xiongzai08(金币+1,VIP+0): 10-24 11:12
做标曲时加入量一般是200uL的血浆加入10uL标准溶液，这样加入后血浆可能会有少量浑浊，不过影响不大，并且你在每一份样品加入的都是10uL标准溶液（浓度不同），平行操作也可以减小误差。另外，在方法学考察时你也要对基质效应进行考察，如果基质效应不强，那你每个样品加入的标准溶液引起的蛋白沉淀不会对结果造成很大影响。
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3楼2009-10-21 17:09:41
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sylgh4923

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
xiongzai08(金币+2,VIP+0): 10-24 11:11
ynmyx(金币+1,VIP+0):谢谢您的热心解答！！ 11-2 13:40
问题1：这时候加的血浆是直接加入抗凝剂后离心所得的血浆吗？
回答：是的。
问题2：如果是这样的话，加入母液是会不会使血浆中的蛋白质变性产生沉淀？
回答：会产生少量的蛋白质变性沉淀，因为甲醇会使蛋白质变性。
问题3：即使没沉淀，这样的对照品进样时会不会产生很多蛋白质类的杂峰？
看到你的这个问题，我断定你是个刚开始做这方面的新手。生物样品、特别是血样，用色谱仪器检测怎么可能没有杂峰呢？只要这些杂峰不干扰你的样品峰就可以了。
做实验之前要多查相关的资料，把基础性的问题搞清后再做，要不然要走好多弯路的。
本人也做过一些药代动力学的工作，有一些经验，如还有相关的问题，也乐意一起讨论，互相交流嘛
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4楼2009-10-22 09:49:35
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