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sunnybear

铁虫 (初入文坛)

[交流] PCR得不到条带,而是弥散的状态是怎么回事?

最近,做了RNA提取,反转录成cDNA后,跑出的不是条带,而是弥散的一片。如果引物设计不对会出现这样的问题吗?还有提取的RNA跑普通的凝胶电泳也是弥散的,这样的RNA可以做反转录吗?需要得到的基因大概在500-700bp,因为看到有论坛上说反转录不要求RNA绝对的完整,请大家指导一下,刚进实验室,还是新手。谢谢了!

[ Last edited by amisking on 2009-10-19 at 17:37 ]
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plantst5928

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
肯定是RNA降解了,被降解的RNA怎么做模板区扩PCR?引物根本就没法结合啊。
4楼2009-10-19 20:47:54
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sunnybear at 2009-10-19 16:37:
最近,做了RNA提取,反转录成cDNA后,跑出的不是条带,而是弥散的一片。如果引物设计不对会出现这样的问题吗?还有提取的RNA跑普通的凝胶电泳也是弥散的,这样的RNA可以做反转录吗?需要得到的基因大概在500-700b ...

“提取的RNA跑普通的凝胶电泳也是弥散的”,这说明RNA提的很不好,是不能用来做反转录的。
2楼2009-10-19 17:00:37
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Entrez1110


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提取的RNA电泳应该看到清晰的28s 及18s条带,质量好的话,两者之间的亮度比为2:1.
5楼2009-10-19 21:32:59
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yxx41

金虫 (小有名气)

楼上的基本都回答完了,既然不出条带,而不是出现非特异性条带,那最大的可能就是模板的质量问题。建议优化RNA提取方法,或者重提,因为可能是你保存的有问题。而且RNA提取本来就比较麻烦啊,各方面都要注意,RNA酶实在是太难避免了,担不是不可避免。
内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
6楼2009-10-19 22:06:58
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