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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR得不到条带，而是弥散的状态是怎么回事？
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sunnybear

铁虫 (初入文坛)

[交流] PCR得不到条带，而是弥散的状态是怎么回事？

最近，做了RNA提取，反转录成cDNA后，跑出的不是条带，而是弥散的一片。如果引物设计不对会出现这样的问题吗？还有提取的RNA跑普通的凝胶电泳也是弥散的，这样的RNA可以做反转录吗？需要得到的基因大概在500-700bp,因为看到有论坛上说反转录不要求RNA绝对的完整，请大家指导一下，刚进实验室，还是新手。谢谢了！

[ Last edited by amisking on 2009-10-19 at 17:37 ]
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1楼 2009-10-19 16:37:03
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
肯定是RNA降解了，被降解的RNA怎么做模板区扩PCR?引物根本就没法结合啊。
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4楼2009-10-19 20:47:54
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by sunnybear at 2009-10-19 16:37:
最近，做了RNA提取，反转录成cDNA后，跑出的不是条带，而是弥散的一片。如果引物设计不对会出现这样的问题吗？还有提取的RNA跑普通的凝胶电泳也是弥散的，这样的RNA可以做反转录吗？需要得到的基因大概在500-700b ...

“提取的RNA跑普通的凝胶电泳也是弥散的”，这说明RNA提的很不好，是不能用来做反转录的。
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2楼2009-10-19 17:00:37
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Entrez1110

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提取的RNA电泳应该看到清晰的28s 及18s条带，质量好的话，两者之间的亮度比为2：1.
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5楼2009-10-19 21:32:59
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yxx41

金虫 (小有名气)
楼上的基本都回答完了，既然不出条带，而不是出现非特异性条带，那最大的可能就是模板的质量问题。建议优化RNA提取方法，或者重提，因为可能是你保存的有问题。而且RNA提取本来就比较麻烦啊，各方面都要注意，RNA酶实在是太难避免了，担不是不可避免。
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
6楼2009-10-19 22:06:58
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