24小时热门版块排行榜    

查看: 978  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

message

铁虫 (初入文坛)

[交流] 质粒提取的问题

我的载体大小是10.55kb,连接上1500Bp的外源片段后,在Kan的LB平板上挑单菌落摇菌后怎么也提不出质粒,我是用试剂盒提的,是提的有问题还是根本就没有质粒,各位大人帮帮忙,先谢过了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lamda

木虫 (著名写手)

笨鸟先飞


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我在提取质粒时碰到过类似的现象。可能的原因会是质粒DNA太大,可能是低拷贝的质粒。所以解决问题的关键是多培养一点菌液,再用试剂盒提取质粒。
低调
8楼2009-10-23 10:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 10-18 22:30
message(金币+1,VIP+0): 10-20 08:55
这个质粒都拷贝数怎么样?我觉得最有可能的就是试剂盒用的有问题,看看溶菌酶、RNA酶什么都都加了没,还有有都Buffer中是需要加乙醇的,看看加了没?如果不行就手抽次看看,如果手抽能抽出来,就说明试剂盒用的有问题,或者试剂盒本身有问题。还有一点就是菌可能有问题,但是因为使用抗性筛选的,所以菌有错误都概率较小。
2楼2009-10-18 21:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjunzhong

金虫 (小有名气)


message(金币+1,VIP+0): 10-20 08:55
可能是没有质粒,可能是假阳性,建议重新连接一次。
3楼2009-10-18 22:02:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)


message(金币+1,VIP+0): 10-20 08:55
别先提质粒,做个菌落(液)PCR鉴别一下是了再提取,再用酶切鉴定,这样省时间,成功率高
4楼2009-10-19 08:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +29 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 30/1500 2026-08-13 21:15 by adXcld3VpUHI
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 10/500 2026-08-13 20:42 by hmhminy
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
信息提示
请填处理意见