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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 替换35s启动子
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虾须镯

新虫 (小有名气)

[求助] 替换35s启动子 已有1人参与

第一次替换启动子。我想替换1300的35s连接别的启动子，我的酶切位点就选Bstx和AatII吗？

替换35s启动子


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1楼 2024-02-23 17:52:47
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天照小星星

新虫 (小有名气)
加我v18466397189 讨论讨论 1.要看下这两酶切序列是否相近相同

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2楼2024-02-23 23:07:38
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天照小星星

新虫 (小有名气)
加我v18466397189 讨论讨论? 2.替换的启动子是否也具备这两个酶切位点 3，替换的启动子是否与下游promoter配套

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3楼2024-02-23 23:10:59
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AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以选择EcoRI，实际这个软件注释的35S要短一些，换句话说，EcoRI前面的一部分序列也是35S的，用哪个酶没关系，关键是是不是效率高，虽然是唯一酶切位点，但是这个酶不好买、贵、效率不高等都是限制使用因素
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4楼2024-02-24 10:07:26
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虾须镯

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by AD_com at 2024-02-24 10:07:26
可以选择EcoRI，实际这个软件注释的35S要短一些，换句话说，EcoRI前面的一部分序列也是35S的，用哪个酶没关系，关键是是不是效率高，虽然是唯一酶切位点，但是这个酶不好买、贵、效率不高等都是限制使用因素

替换启动子是不是不能单酶切，那我另一个选择什么比较好呀

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5楼2024-02-24 18:56:15
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AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 虾须镯 at 2024-02-24 18:56:15
替换启动子是不是不能单酶切，那我另一个选择什么比较好呀
...

可以单酶切啊，前提是启动子前后都有这个酶切位点，而且单酶切以后要是用T4连接的话自连非常严重，可以考虑同源重组。
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6楼2024-02-25 12:26:47
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虾须镯

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by AD_com at 2024-02-25 12:26:47
可以单酶切啊，前提是启动子前后都有这个酶切位点，而且单酶切以后要是用T4连接的话自连非常严重，可以考虑同源重组。...

谢谢您，我想问问我打算双酶切然后同源重组，因为我看我这个启动子只有一端有Ecor1，另一端还不知道用什么切

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7楼2024-02-25 16:20:13
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AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 虾须镯 at 2024-02-25 16:20:13
谢谢您，我想问问我打算双酶切然后同源重组，因为我看我这个启动子只有一端有Ecor1，另一端还不知道用什么切
...

后面那俩都行，就看你们实验室有哪个或者看看哪一个好买，这种不常用的酶我都没用过，最简单的是找公司问问就行了。按理说这个载体的35S后面会有XmaI或者Smal这种酶切位点的，你这为啥没有。
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8楼2024-02-25 16:46:14
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