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链霉亲和素珠子富集不到生物素化的蛋白？
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题主最近在做ABPP技术里的亲和富集实验，设计了一种光亲和探针，含有炔基和二苯甲酮基团。首先通过紫外光照，将探针与靶标蛋白共价连接，然后再进行click反应偶联叠氮生物素，再与链霉亲和素珠子结合，然后trypsin酶切，但是酶切后总是没有东西，也试过用loading buffer直接煮沸珠子，煮下来的蛋白大多是链霉亲和素的单链，也没有什么蛋白。这个探针也做过荧光的验证，能做出来是没有问题的，但是在光反应和click反应之后都加了有机试剂沉淀蛋白。 不知道是哪里可能存在问题，还想请各位大神指点！感激不尽 |
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tzynew2楼
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hyjcs3楼
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