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000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 求助

请大侠看看这个酶切反应体系怎么设计?
NotI和XhoI进行双酶切 10uL体系
怎么设计酶切体系????
急急急!!!

[ Last edited by amisking on 2009-10-13 at 19:19 ]
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36678293

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-14 08:11
是鉴定吗?如果是鉴定,查阅两个酶适合用那个buffer,takara目录里面有,直接切就行了。

如果是做载体,建议先用一个酶切,然后回收,然后在用另外一个酶切,在回收,就OK了!!!

如果还不会,我可以帮你做,QQ36678293
2楼2009-10-13 22:35:56
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plantst5928

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
先看看你用的是几倍的buffer,计算一下buffer的量,然后把酶切的底物根据你的需要加进去,两个酶的总量不能超过总体积的10%,也就是你的酶各加0.5ul,其他的用水补齐,看看需不需要加BSA,一般是100倍的.
3楼2009-10-13 23:21:42
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
说下你要切什么东西,及浓度怎么样啊!
4楼2009-10-13 23:53:11
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dingqian03

银虫 (小有名气)


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说的详细点吧,比如浓度,buffer什么的
5楼2009-10-13 23:56:58
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000zgh000

新虫 (小有名气)

切的是质粒,7863bp,
浓度很大,请问怎么设计,以及酶切时间如何把握??还有酶切时经常将质粒切没了……不知道什么原因???
6楼2009-10-14 17:00:03
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bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
10xbuffer 2ui,水1ui,质粒7ui,酶各0.5ul差不多这样就可以  质粒的量可以根据浓度调整
7楼2009-10-14 17:14:00
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