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000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 求助

请大侠看看这个酶切反应体系怎么设计？
NotI和XhoI进行双酶切 10uL体系
怎么设计酶切体系？？？？
急急急!!!

[ Last edited by amisking on 2009-10-13 at 19:19 ]
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1楼 2009-10-13 16:23:48
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36678293

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-14 08:11
是鉴定吗？如果是鉴定，查阅两个酶适合用那个buffer，takara目录里面有，直接切就行了。

如果是做载体，建议先用一个酶切，然后回收，然后在用另外一个酶切，在回收，就OK了！！！

如果还不会，我可以帮你做，QQ36678293
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2楼2009-10-13 22:35:56
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先看看你用的是几倍的buffer，计算一下buffer的量，然后把酶切的底物根据你的需要加进去，两个酶的总量不能超过总体积的10%，也就是你的酶各加0.5ul，其他的用水补齐，看看需不需要加BSA，一般是100倍的.
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3楼2009-10-13 23:21:42
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
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说下你要切什么东西，及浓度怎么样啊！
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4楼2009-10-13 23:53:11
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dingqian03

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
说的详细点吧，比如浓度，buffer什么的
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5楼2009-10-13 23:56:58
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000zgh000

新虫 (小有名气)
切的是质粒，7863bp，
浓度很大，请问怎么设计，以及酶切时间如何把握？？还有酶切时经常将质粒切没了……不知道什么原因？？？
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6楼2009-10-14 17:00:03
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
10xbuffer 2ui,水1ui,质粒7ui,酶各0.5ul差不多这样就可以  质粒的量可以根据浓度调整
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7楼2009-10-14 17:14:00
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