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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达 引物设计问题
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yoyoyehan

[交流] 原核表达 引物设计问题

请问大家：做原核表达设计引物应该在起始密码子和终止密码子哪个位置？也就是说扩增子中应该包括包括它们么？
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1楼 2009-10-12 20:28:20
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ysywc

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+1,VIP+0): 10-13 11:37
恩两个酶切位点最好离得远一些，那样方便切开，要是太近不太好连接
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3楼2009-10-13 11:32:14
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-13 11:37
一般就是在起始密码子和终止密码子处设计引物，两侧再加上酶切位点。最好不要设计在起始密码子太远，否则如果前面还有ATG的话可能会引起错误表达。
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2楼2009-10-12 20:47:57
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delia1013

木虫 (著名写手)
★
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还要看你要不要带tag啊，比如你需要c端带tag，就不要终止c端啊
另外比如酶切位点Nde1 是catatg,那你设计的时候起始密码就不用再重复一个atg啦~~
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4楼2009-10-13 12:04:20
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
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取决于你要表达哪一段，你想表达全部编码区就都包括，想表达一部分也可以
很多原核表达载体是有ATG的，可以不用加起始密码子，要是没有得就加上
范围是根据你的实验要求自己选定的
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5楼2009-10-13 12:21:35
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