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汕头大学海洋科学接受调剂
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yoyoyehan

[交流] 原核表达 引物设计问题

请问大家:做原核表达设计引物应该在起始密码子和终止密码子哪个位置?也就是说扩增子中应该包括包括它们么?
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

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amisking(金币+2,VIP+0): 10-13 11:37
一般就是在起始密码子和终止密码子处设计引物,两侧再加上酶切位点。最好不要设计在起始密码子太远,否则如果前面还有ATG的话可能会引起错误表达。
2楼2009-10-12 20:47:57
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ysywc

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+1,VIP+0): 10-13 11:37
恩两个酶切位点最好离得远一些,那样方便切开,要是太近不太好连接
3楼2009-10-13 11:32:14
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delia1013

木虫 (著名写手)


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还要看你要不要带tag啊,比如你需要c端带tag,就不要终止c端啊
另外比如酶切位点Nde1 是catatg,那你设计的时候起始密码就不用再重复一个atg啦~~
4楼2009-10-13 12:04:20
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bioxixi

木虫 (著名写手)


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取决于你要表达哪一段,你想表达全部编码区就都包括,想表达一部分也可以
很多原核表达载体是有ATG的,可以不用加起始密码子,要是没有得就加上
范围是根据你的实验要求自己选定的
5楼2009-10-13 12:21:35
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zier1011

木虫 (著名写手)


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引物设计不是要带其实密码子的吗?终止子倒是不用
花还香香的
6楼2009-10-15 11:19:28
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ysywc

金虫 (小有名气)

真核溶壁酶


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请问各位虫友知道溶壁酶如何配吗?谢谢
7楼2009-12-15 22:34:11
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