| 查看: 286 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
PCR定点突变
|
|||
|
本人刚开始做定点突变，有问题想请教一下。我的片段大概800bp，克隆在22b质粒上。现在想在片段上改变一个或者几个碱基。不打算用试剂盒。网上搜了几种方法，比较快的是用高保真酶来做PCR，得到整个质粒后用Dnp I 酶进行消化然后转化至大肠杆菌。 那么我想问，用高保真酶设计引物的时候，是以突变碱基为中心点，两边延伸12-16个碱基（即突变碱基在引物中心），还是以引物5‘端邻接,3’端相反的原则进行设计呢？还有的说突变点位于5‘端第5位，我都要晕了。帮帮忙吧。 另外退火时间一般设多长？说明书上是5s或15s，有人用30s。 这种方法还有什么值得注意的地方么？多谢大家了。 [ Last edited by zzgyb on 2009-12-21 at 20:29 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
336材料与化工085600求调剂
已经有21人回复
-
材料与化工专硕306分找合适调剂
已经有17人回复
-
278求调剂
已经有10人回复
-
266求调剂
已经有7人回复
-
生物学308分求调剂（一志愿华东师大）做过分子实验
已经有5人回复
-
一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂
已经有5人回复
-
259求调剂
已经有4人回复
-
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有7人回复
-
071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂
已经有13人回复
-
287求调剂
已经有8人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - 博学EPI: 1
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2009-10-20 22:32:27
yuanqing6622
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 29.6
- 帖子: 48
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 747312
- 注册: 2009-04-13
- 性别: GG
- 专业: 工程力学
3楼2009-10-30 12:04:42
4楼2009-10-31 12:59:47
fjc100648
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1024.6
- 帖子: 165
- 在线: 18.4小时
- 虫号: 123347
- 注册: 2005-12-05
- 性别: GG
- 专业: 其他病原微生物及感染与宿
5楼2009-11-01 15:22:36
6楼2009-11-06 17:11:10
