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虾须镯

新虫 (小有名气)

[求助] 连接体系

加了20ul的连接体系,第一次转化用了10ul,没连上,剩下10ul还能再次用来转化吗?

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AD_com

金虫 (小有名气)

用过的没连上,剩下的大概率也不会连上。建议稍微调节一下比例测测浓度之类的,要是T4连接酶可以温度低一点时间长一点,比如22度2小时,要是同源重组那就50度40分钟以上,可以改善一下。
3楼2023-12-14 10:09:48
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

觉得没必要重新转化吧,如果成功了,这10微升就够了。建议从头开始,重新扩增目的片段,提高回收浓度,按连接比例配比体系,重新连接和转化。

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特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
2楼2023-12-13 12:47:32
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虾须镯

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2023-12-13 12:47:32
觉得没必要重新转化吧,如果成功了,这10微升就够了。建议从头开始,重新扩增目的片段,提高回收浓度,按连接比例配比体系,重新连接和转化。

我的载体浓度是65,两个基因一个浓度是61一个是16,16是不是有些太低了呀,这些浓度合适吗

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4楼2023-12-15 17:24:52
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虾须镯

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by AD_com at 2023-12-14 10:09:48
用过的没连上,剩下的大概率也不会连上。建议稍微调节一下比例测测浓度之类的,要是T4连接酶可以温度低一点时间长一点,比如22度2小时,要是同源重组那就50度40分钟以上,可以改善一下。

我的片段死2000,用的同源重组37度半小时,连接的比例用的2:1是不是,载体浓度65,基因一个61一个16,需不需要调整比例呀

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5楼2023-12-15 17:26:47
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