超长引物PCR - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2009-10-12 12:01:29

hobers

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Originally posted by nancysea at 2009-10-12 10:21:

如果是以质粒为模板，应该不难扩增，可以用两步法结合Touchdown的方法，
如果模板是cDNA那么还是分段扩增好

两步法结合Touchdown，能详细解释下吗？？谢谢了

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12楼2009-10-12 12:07:14

lixiahe

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这么长的引物基本不用去考虑它的二级结构了，把退火和延伸合并起来试试看。
SOE(重叠序列延伸法)也可以试试

[ Last edited by lixiahe on 2009-10-12 at 13:48 ]

天天小木虫

13楼2009-10-12 13:46:45

yituyitu

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你先用正常的程序做一下试试，我用过50个碱基对的引物，没有问题。你先试试再说

14楼2009-10-12 13:51:56

雪山飞狐7233

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你的引物是不是按照soe-pcr设计的。

梦在路就在！

15楼2009-10-12 15:14:17

hobers

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Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2009-10-12 15:14:
你的引物是不是按照soe-pcr设计的。

不是。。。引物设计选择的余地不多，基本没法怎么改动，最多在3端增减几个碱基。。。

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16楼2009-10-12 23:35:43

goodwish

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比较有难度。先前为了方便表达纯化，经常用五六十bp的引物，不过再长的就不敢尝试了~

生命的海洋里，我是蓝色的一滴

17楼2009-10-13 01:40:08