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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 超长引物PCR
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hobers

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by nancysea at 2009-10-12 10:21:

如果是以质粒为模板，应该不难扩增，可以用两步法结合Touchdown的方法，
如果模板是cDNA那么还是分段扩增好

两步法结合Touchdown，可以详细点解释下吗？谢谢了！
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11楼2009-10-12 12:01:29
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hobers

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by nancysea at 2009-10-12 10:21:

如果是以质粒为模板，应该不难扩增，可以用两步法结合Touchdown的方法，
如果模板是cDNA那么还是分段扩增好

两步法结合Touchdown，能详细解释下吗？？谢谢了
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12楼2009-10-12 12:07:14
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lixiahe

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么长的引物基本不用去考虑它的二级结构了，把退火和延伸合并起来试试看。
SOE(重叠序列延伸法)也可以试试

[ Last edited by lixiahe on 2009-10-12 at 13:48 ]
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天天小木虫
13楼2009-10-12 13:46:45
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yituyitu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你先用正常的程序做一下试试，我用过50个碱基对的引物，没有问题。你先试试再说
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14楼2009-10-12 13:51:56
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的引物是不是按照soe-pcr设计的。
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梦在路就在！
15楼2009-10-12 15:14:17
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hobers

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 雪山飞狐7233 at 2009-10-12 15:14:
你的引物是不是按照soe-pcr设计的。

不是。。。引物设计选择的余地不多，基本没法怎么改动，最多在3端增减几个碱基。。。
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16楼2009-10-12 23:35:43
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
比较有难度。先前为了方便表达纯化，经常用五六十bp的引物，不过再长的就不敢尝试了~
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
17楼2009-10-13 01:40:08
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